以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
PLpro inhibitor是PLpro抑制劑,IC50為2.6uM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1093070-14-4 分子量:346.42 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
布南色林英文名稱: Nystatin配對盒基因9抗體包裝1g
雌莫司汀磷鈉英文名稱: SULBENICILLINP-鈣粘附分子抗體包裝5g
醋唑英文名稱: Acetylspiramycin腺苷環(huán)化激活肽-38抗體包裝100mg
醋磺米英文名稱: Potassium trichloroammineplatinate(II)腫瘤抑制基因P53蛋白抗體(野生型P53)包裝5g
醋優(yōu)力司特;醋烏利司他英文名稱: Sisomicin腫瘤抑制基因p63α抗體包裝100mg
醋增血壓英文名稱: spectinomycin磷二酯4A8抗體包裝100g
地克珠利英文名稱: 5-MTHF;5-Methyltetrahydrofolic Acid Calcium Salt Trihydrate血小板源性生長因子AB+BB抗體包裝25g
地拉考昔英文名稱: Kitasamycin增殖核抗原抗體包裝100g
地拉羅司,去鐵斯若英文名稱: josamycin腦特異性多肽蛋白19抗體包裝25g
地馬格列英文名稱: Midecamycin Acetate三磷腺苷門控陽離子通道蛋白抗體包裝5g
地美司鈉英文名稱: Etimicin硫氧還蛋白過氧化物Ⅱ/巰基抗氧化蛋白抗體包裝1g
地美溴英文名稱: Paromomycinp53凋亡相關(guān)作用蛋白PMP22抗體包裝250mg
地瑞那韋乙鹽英文名稱: Teicoplanin 磷核糖咪唑羧化抗體包裝100g
地塞米松環(huán)氧解物英文名稱: Nystatin神經(jīng)生長因子受體抗體包裝25g
度骨化英文名稱: Inosine 5'-Monophosphate(IMP)腫瘤錯配修復(fù)基因PMS1抗體包裝1g
核盤菌Sclerotinia│sclerotiorum 質(zhì)量規(guī)格:>60%,BR活化X試劑盒白頭翁皂苷B4;Anemoside B4
青紫黑鏈霉菌Streptomyces│glaucovioatratus 質(zhì)量規(guī)格:>95%活化Ⅻ試劑盒畢靈堿;(+)-Bicucullin
聚多曲霉Aspergillus│sydowii 質(zhì)量規(guī)格:效價測定活化蛋白C試劑盒斑蝥;Cantharidin
PLpro抑制劑(PLpro inhibitor)轉(zhuǎn)錄激活因子MYB抗體肥胖抑制(OB)檢測試劑盒OB ELISA Kit
陽離子通道相關(guān)蛋白1抗體肥大細(xì)胞類糜蛋白1(CMA1)檢測試劑盒CMA1 ELISA Kit
1號染色體開放閱讀框222抗體防御β2(DEFβ2)檢測試劑盒DEFβ2 ELISA Kit
2號染色體開放閱讀框15抗體防御β1(DEFβ1)檢測試劑盒DEFβ1 ELISA Kit
骨架相關(guān)蛋白4抗體防御α5(DEFα5)檢測試劑盒DEFα5 ELISA Kit
肌肽二肽1抗體防御α1(DEFα1)檢測試劑盒DEFα1 ELISA Kit
性線粒體肌激抗體芳香烴受體核轉(zhuǎn)位因子(ARNT)檢測試劑盒ARNT ELISA Kit
碳酐相關(guān)蛋白8抗體芳香烴受體(AhR)檢測試劑盒AhR ELISA Kit
鈣通道電壓依賴性β1蛋白抗體泛結(jié)合E2A(UBE2A)檢測試劑盒UBE2A ELISA Kit