以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
CRT0066101dihydrochloride是有效,選擇性的PKD抑制劑,對PKD1,2和3的IC50值分別為1,2.5和2nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1883545-60-5 純度:98.94% 分子量:374.87 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
枯草芽胞桿菌Pichia farinosa
空泡單胞菌Sporobolomyces foliicola
球孢白僵菌Debaryomyces hansenii var. fabryi
長枝木霉Pichia fermentans
釀酒酵母Williopsis californica
大腸埃希菌Hanseniaspora opuntiae
多主葡萄殼菌Pichia anomala
貪噬菌Pichia membranifaciens
貝氏不動桿菌Pichia membranifaciens
綠青鏈霉菌Pichia membranifaciens
黃色長孢鏈霉菌Pichia membranifaciens
香菇Pichia membranifaciens
黃曲霉Pichia membranifaciens
茄鏈格孢Pichia membranifaciens
桔橙鏈霉菌Pichia membranifaciens
德氏乳桿菌保加亞亞種Pichia membranifaciens
小鼠活化蛋白C(APC)免疫試劑盒β淀粉樣肽 1-40(C端)抗體人抗巨噬抗體(anti-macrophage Ab) 莫諾宗
小鼠黃體生成(LH)免疫試劑盒β-抑制蛋白2抗體/β休止蛋白2/β-arrestin抗體人抗巨噬抗體(anti-macrophage Ab) 莫諾苷
小鼠(cAMP)免疫試劑盒炭疽桿菌抗體人抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab) 牡丹皮苷C
小鼠環(huán)磷鳥苷(cGMP)免疫試劑盒腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白抗體人抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab) 牡荊內(nèi)酯
PKD抑制劑(CRT0066101 dihydrochloride)S100 alpha 2 英文名稱: S100A2抗體 0.2ml
EAAT3 英文名稱: 膠質(zhì)細胞谷酸運載蛋白3抗體(神經(jīng)/上皮細胞谷酸運載蛋白) 0.1ml
胸腺肽 α-1抗體 Anti-Thymosin α-1 0.1ml
Anti-OVA/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗雞卵白蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-KSR1 (Ser392) 磷酸化Ras信號轉(zhuǎn)導(dǎo)KSR1蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
PACAP-38 腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg