以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
RSK2抑制劑(FMK) | FMK | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
FMK是一種不可逆的RSK2抑制劑,能夠共價修飾RSK的C末端區(qū)域。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:821794-92-7 別名:RSK2 kinase inhibitor 純度:98.0% 分子量:342.37 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
印度洋新鞘菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgGAnti-TLR1 Antibody分揀連接蛋白13(SNX13)
粉褶側(cè)耳、粉紅側(cè)耳Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗牛IgGAnti-TLN2 Antibody分揀連接蛋白12(SNX12)
果生鏈核盤菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗牛IgGAnti-TLR1 Antibody分揀連接蛋白11(SNX11)
殼菌PE-Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR1 Antibody分揀連接蛋白10(SNX10)
琉球曲霉PE-CY5標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR10 Antibody分揀連接蛋白1(SNX1)
叢毛單胞菌APC標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR1 Antibody分揀蛋白1(SORT1)
展示接霉Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR2 Antibody分層蛋白(SFN)
解脂亞羅酵母Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR3 Antibody肺部激活調(diào)節(jié)趨化因子(PARC)
柿生假絲酵母Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR5 Antibody腓骨蛋白7(FBLN7)
解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種Cy5標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR4 Antibody肥胖抑制(OB)
木霉Cy5.5標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR5 Antibody(PB0472)肥大類糜蛋白1(CMA1)
美澳型核果褐腐病菌Cy7標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR7 Antibody鯡精激(DOLK)
酵母屬生物標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR7 Antibody(PB0473)非受體型蛋白酪磷6(PTPN6)
龜裂鏈霉菌龜裂亞種膠體金標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR8 Antibody非受體型蛋白酪磷1(PTPN1)
Lonsdalea quercina subsp. britannicaAlexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TLR9 Antibody非受體酪激2(TNK2)
土生類諾卡氏菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗牛IgMAnti-TMBIM1 Antibody非紅血影蛋白β4(SPTβN4)
肝糖原磷化抗體發(fā)酵纖維單胞菌人腹膜毛細(xì)血管組織提取物
肌肉糖原磷化抗體豇豆慢生根瘤菌人冠狀動脈組織提取物
早幼粒細(xì)胞白血病蛋白抗體鰒發(fā)光桿菌人臍動脈組織提取物
麻瘋病和帕金森氏病共同調(diào)節(jié)蛋白抗體斯氏梭菌人大隱靜脈組織提取物
RSK2抑制劑(FMK)細(xì)交鏈格孢(可訂購) 表兒茶3-O-(3''-O-甲基)沒食子酸酯
灰葡萄孢(灰霉?。?/span> 5-沒食子?;鼘幩?/span>
肉桂鏈霉 箭藿苷C
節(jié)桿 苦瓜 I
Pedobacter 牡荊-4''-O-葡萄糖苷
枯草芽胞桿 新夏佛托苷
松針散斑殼 葉下珠新
四草海桿狀 安納基林
泳池芽殖單胞 (+)-丁香樹脂酚
總狀毛霉 靈芝酸K
大腸埃希氏定量標(biāo)準(zhǔn)株 靈芝酸H
頂青霉 靈芝酸C2
新科木耳(平菇) 靈芝酸C1
漢氏鹽單胞 靈芝酸B
孟氏假單胞 化錦葵色-3-O-阿拉伯糖苷