PI3K抑制劑（CAL-130 Hydrochloride）

PI3K抑制劑（CAL-130 Hydrochloride）公司*的產(chǎn)品：Anti-NPY2R/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)肽Y受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-HBsAg/FITC 熒光素標(biāo)記山羊抗人乙肝表面抗原抗體 IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
鼠抗人CD10單克隆抗體 Anti-CD10 0.1

商品介紹：

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

金黃色葡萄球菌Rhodotorula fujisanensis

山綠豆根瘤菌Bullera mrakii

斯氏李斯特氏菌Bullera sp.

海水希瓦氏菌Rhodotorula sp.

秦氏蜜環(huán)菌Pseudozyma sp.

微紫青霉Bullera oryzae

人蒼白桿菌Pichia sp.

大腸埃希菌Saccharomyces cerevisiae

白地霉Saccharomyces cerevisiae

少根根霉戴爾變種Saccharomyces cerevisiae

季也蒙畢赤酵母Saccharomyces ellipsoideus

泡盛曲霉Saccharomyces cerevisiae

根瘤菌Rhodotorula sp.

鏈霉菌Candida sp.

灰樹花*Saccharomyces cerevisiae

膠質(zhì)芽孢桿菌Saccharomyces oviformis

小鼠白蛋白免疫試劑盒堿性成纖維生長因子抗體人抗乙型肝炎病e抗體(HBeAb) 三葉豆苷

小鼠氧化(含黃)A(MAOA)免疫試劑盒癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體人抗乙型肝炎病e抗體(HBeAb) 三葉豆紫檀苷

小鼠癌胚抗原(CEA)免疫試劑盒牛血清白蛋白抗體人抗流行性出血熱病抗體IgM (EHF) 桑根C

小鼠阿立新A(Orexin A)免疫試劑盒β-酪蛋白抗體人抗流行性出血熱病抗體IgM (EHF) 桑根D
PI3K抑制劑（CAL-130 Hydrochloride）Slit1 英文名稱： 多重表皮生長因子樣蛋白4抗體 0.2ml

EAAT1 英文名稱： 膠質(zhì)細(xì)胞谷酸運(yùn)載蛋白1抗體 0.1ml

半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體(人) Anti-Caspase-12 0.1ml

Anti-Phospho-TNK1 (Tyr277)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化非受體型酪氨酸蛋白激酶Tnk1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-HSF1(Ser303) 磷酸化熱休克因子1抗體 規(guī)格 0.2ml

MIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha) 巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg