商品介紹:
CP-724,714是HER2/ErbB2抑制劑,IC50為10nM,比對EGFR,InsR,IRG-1R,PDGFR,VEGFR2,Abl,Src和c-Met的抑制性高640倍。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:383432-38-0 純度:98.19% 分子量:469.54 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
樟疫霉Pseudomonas mendocina大鼠糖原磷化同工MM(GP-MM)
平菇(武漢1號)Pseudomonas mendocina大鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)
云芝栓孔菌 (變色栓菌)Pseudomonas mendocina大鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)
唐菖蒲伯克霍爾德氏菌Pseudomonas mendocina大鼠甲狀腺抗體(TAb)
無Pseudomonas mendocina大鼠甲狀腺抗體(TAb)
煙曲霉Pseudomonas migulae大鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)
柔嫩艾耳球蟲Pseudomonas mucidolens大鼠抗促甲狀腺受體抗體(TRAb)
山茶Pseudomonas nifroreducens大鼠兒茶(CA)
多根硬皮馬勃Pseudomonas nitroreducens大鼠兒茶(CA)
Pseudomonas plecoglossicidaPseudomonas migulae大鼠白介27(IL-27)
稻生擲孢酵母Pseudomonas oleovorans大鼠白介27(IL-27)
分枝卷霉Pseudomonas oleovorans大鼠白介23(IL-23)
聚貪噬菌Pseudomonas oleae大鼠白介23(IL-23)
味側(cè)耳Pseudomonas oleovorans大鼠心肌營養(yǎng)1(CT-1)
白地霉Pseudomonas oleovorans大鼠心肌營養(yǎng)1(CT-1)
釀酒酵母Pseudomonas oleovorans大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)
神經(jīng)細胞凋亡調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化蛋白1抗體前蛋白轉(zhuǎn)化枯草溶菌9清酒酵母維生C(VC)比色法測試盒
組蛋白精甲基轉(zhuǎn)移6抗體杰丁漢遜酵母肝功能 肝功能 肝功能 肝功能 肝功能 肝功能
絲蛋白8抗體不動桿菌基轉(zhuǎn)移(谷轉(zhuǎn)/ALT/GPT)比色法測試盒(賴氏法)
前列腺E2抗體綠色木霉=木木霉谷草轉(zhuǎn)(AST)比色法測試盒(賴氏法)
HER2/ErbB2抑制劑(CP-724714)仁果叢梗孢
白色念珠 千層紙A-7-0-β-D-葡萄糖酸苷
消化乳桿 肉堿
鹽沼鹽古桿 漢黃芩苷
產(chǎn)黃青霉 鹽酸吡哆
北方蜜環(huán) 氫東莨菪堿
蠟狀芽孢桿 鹽酸吡哆
健康皮張抗原(羊皮2) 五味子
毛柄(金針菇) 磷酸吡哆
棒束青霉 歐當歸內(nèi)酯A
紫紅曲霉 維生B12
雞傷寒沙門氏 維生B6
圍小叢殼 千金子二萜二乙酰苯甲酰酯
釀酒酵母 維生B5
產(chǎn)氣腸桿 連翹酯苷A