雙重泛PI3K/mTOR抑制劑(GNE-493)

雙重泛PI3K/mTOR抑制劑(GNE-493)公司正在出售的產品：Anti-Phospho-FAK (Tyr397) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化粘著斑激酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-HRP 兔抗HRP (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg
葡萄糖轉運蛋白3抗體 Anti-

商品介紹：

以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。

對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。

3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。

4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。

建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

無色桿菌屬Arthrobacter sp.

黃桿菌Cryobacterium psychrotolerans

釀酒酵母Micrococcus sp.

栗疫菌Bacillus sp.

枯草芽孢桿菌Brevundimonas sp.

枯草芽孢桿菌Arthrobacter sp.

黑曲霉Achromobacter xylosoxidans

南方散斑殼Escherichia coli

暗鱗白鬼傘Pseudomonas aurantiaca

多源中間根瘤菌Pseudomonas stutzeri

豬丹絲菌Pseudomonas agarici

灰樹花GF-5Pseudomonas fragi

林生毛霉Pseudomonas putida

佐氏庫特氏菌Pseudomonas corrugata

枯草芽孢桿菌Pseudomonas lundensis

施氏假單胞菌Pseudomonas oleovorans

緩生解新鞘菌Novosphingobium│tardaugens 質量規(guī)格：HPLC法含量測定

檸檬色赤桿菌Erythrobacter│citreus 質量規(guī)格：含量測定

靈芝Ganoderma│lucidum 質量規(guī)格：供HPLC法含量測定用
雙重泛PI3K/mTOR抑制劑(GNE-493)STIL 英文名稱： 中斷位點蛋白STIL抗體 0.2ml

ELMO1 英文名稱： 吞噬細胞運動蛋白1抗體 0.2ml

鼠抗人促甲狀腺素單克隆抗體 Anti-TSH 0.1ml

Anti-TRF1/FITC 熒光素標記端粒結合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-IRF3 (Ser396) 磷酸化干擾素調節(jié)因子3 規(guī)格 0.1ml

Alpha-Synuclein 核突觸蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg