詳細介紹
商品介紹:
TAK-733是MEK變構抑制劑,對MEK1的IC50為3.2nM,而對Abl1,AKT3,c-RAF,CamK1,CDK2和c-Met則無活性。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1035555-63-5 純度:99.74% 分子量:504.23 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
TAK-733 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
金頂側耳微白蛋白/細小清蛋白抗原Anti-DP-2 Antibody人神經絲蛋白(NF)
炭疽芽孢桿菌酪酪肽多肽(1-36)Anti-DPP7 Antibody人神經絲蛋白(NF)
淺灰白鏈霉菌Rad51抗原Anti-DPYSL2 Antibody人尿肽(KP)
蠟狀芽孢桿菌Rap1A抗原Anti-DPYSL2 Antibody人尿肽(KP)
淡青鏈霉菌維甲受體-β抗原Anti-DPPA4 Antibody人神經降壓(NT)
大腸埃希氏菌Ras相關區(qū)域家族1A抗原Anti-DPYSL4 Antibody人神經降壓(NT)
青藍馬杜放線菌抵抗抗原Anti-DPYSL4 Antibody人神經激肽B(NKB)
毛霉屬G蛋白信號轉導調節(jié)因子2抗原Anti-DQX1 Antibody人神經激肽B(NKB)
粘質沙雷氏菌RhoA抗原Anti-DRD4 Antibody人強啡肽(Dyn)
大腸埃希氏桿菌RhoC抗原Anti-DROSHA Antibody人強啡肽(Dyn)
皺紋單胞菌環(huán)指蛋白148抗原Anti-DRD1 Antibody人腦啡肽(ENK)
基恩帚枝霉Rho相關蛋白激1抗原Anti-DROSHA Antibody人腦啡肽(ENK)
釀酒酵母Rho相關蛋白激2抗原Anti-DSG1 Antibody人γ肽(Pγ)
Bacillus methylotrophicus核受體RXRα抗原Anti-DUSP1 Antibody人γ肽(Pγ)
矩圓黑盤孢6-磷山梨脫氫抗原Anti-DTYMK Antibody人C型鈉尿肽(CNP)
小麥曲根霉S100B蛋白抗原Anti-DUS2 Antibody人C型鈉尿肽(CNP)
轉錄調節(jié)因子MAZR抗體貝酵母人胃癌細胞(未分化)
淋巴細胞胞漿蛋白LCP1抗體白球擬酵母人食管鱗癌細胞
黑色瘤優(yōu)先表達抗原抗體沼澤紅假單胞菌小鼠腦神經瘤細胞
磷脂C1樣蛋白抗體類球紅細菌(球形紅桿菌)人胰腺腺泡上皮癌
MEK變構抑制劑(TAK-733)東北毛霉 里靈A
秦氏蜜環(huán) Lasiodiplodin
Bacillus atrophaeus 落葉松樹脂二甲
地衣芽孢桿 Lansiumarin C
雞傷寒沙門氏 四乙酸堪酯
渾濁紅球 Kadsurin A
糖化酵母 Juglanin
庫特氏屬 Isothymusin
新疆類芽孢桿 Isosativan
生脂固氮螺 Isomangiferolic acid
枯草芽孢桿 B 異野葛
月夜 異戈米辛 O
羊肚(不能訂購) 異柿醌
近綠曲霉 異木香酸
赭曲霉 Isoboonein