以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
PI3K-IN-1是PI3K抑制劑,在WO2012103524A2和WO2013147649A2兩個中被報道。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1349796-36-6 純度:99.70% 分子量:599.66 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
圍小叢殼Saccharomyces cerevisiae
黑曲霉Saccharomyces cerevisiae
異配囊接霉Saccharomyces cerevisiae
兔出血癥病Saccharomyces cerevisiae
無菌藥品 霉菌和酵母菌總數(shù) Saccharomyces cerevisiae
生黑孢鏈霉菌Saccharomyces cerevisiae
土生隱球酵母Saccharomyces cerevisiae
鏈霉菌Zygosacchoromyces rouxii
新城疫病Torulopsis etchellsii
魯氏接合酵母Saccharomyces cerevisiae
猴頭菌Saccharomyces cerevisiae
大腸埃希氏菌Saccharomyces cerevisiae
土壤谷桿菌Saccharomyces cerevisiae
煙灰褐絲膜菌Saccharomyces cerevisiae
聚紅粉端孢霉Saccharomyces cerevisiae
類芽胞桿菌Saccharomyces cerevisiae
小鼠γ分泌免疫試劑盒磷化相關(guān)死亡促進因子抗體人抗甲型肝炎病IgG抗體(anti-HAV) 色
小鼠γ基丁(GABA)自身抗體IgG 免疫試劑盒BarX1蛋白抗體人抗甲型肝炎病IgG抗體(anti-HAV) 沙蟾精
小鼠γ基丁(GABA)免疫試劑盒β1,3半乳糖轉(zhuǎn)移3抗體人抗副流感病IgM抗體(anti-PIV IgM) 沙苑子苷A
小鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)免疫試劑盒紅陰離子交換蛋白1抗體人抗副流感病IgM抗體(anti-PIV IgM) 鯊肌
PI3K抑制劑(PI3K-IN-1)SEMA6C 英文名稱: 軸突導向因子SEMA6C抗體 0.2ml
ECG2 英文名稱: 食道癌相關(guān)基因抗體 0.1ml
細胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體 Anti-Cav-1 0.1ml
Anti-Tyk2/Non receptor tyrosine protein kinase 2/FITC 熒光素標記非受體酪氨酸蛋白激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-HP1(Tyr43) 異染色質(zhì)蛋白1磷酸化抗體(果蠅) 規(guī)格 1ml
CCL14/HCC-1(C-C motif chemokine 14) 嗜酸粒細胞趨化蛋白14抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg