KDM4D抑制劑（KDM4D-IN-1）

KDM4D抑制劑（KDM4D-IN-1）公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-Mtp53/FITC 熒光素標(biāo)記突變型P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Anti-Chicken IgG/Biotin 生物素化羊抗雞IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
抗Ⅹ型膠原抗體 Anti-CollagenⅩ 0.2ml
Mouse

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時(shí)內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
果生假絲酵母Saccharomyces cerevisiae

土地鞘盒菌Candida intermedia var. intermedia

蠟狀芽孢桿菌Pseudozyma rugulosa

普通變形菌Pichia pastoris

曼被孢霉Pichia ohmeri

總狀毛霉Rhodosporidium toruloides

鹽帽黃桿菌Sporidiobolus salmonicolor

Candida ethanolica

黑曲霉Bullera oryzae

青霉屬Saccharomyces cerevisiae

木糖氧化纖維菌反硝化亞種Saccharomyces cerevisiae

俄勒岡靈芝Saccharomyces cerevisiae

薄層菌屬Saccharomyces cerevisiae

黃產(chǎn)色鏈霉菌Saccharomyces cerevisiae

膠孢Candida krusei

暗孢節(jié)菱孢菌Candida krusei

小鼠黑色抗體(MC Ab)免疫試劑盒ATP結(jié)合蛋白家族5抗體人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1) 木蘭脂

小鼠黑色瘤免疫試劑盒N-甲基DNA糖基化人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1) 木栓

小鼠核轉(zhuǎn)錄因子kBP65(NFkBP65)免疫試劑盒AU5 tag標(biāo)簽抗體人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab) 木糖

小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)免疫試劑盒鈣離子ATP通道蛋白抗體人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab) 木通乙苷B
KDM4D抑制劑（KDM4D-IN-1）STAT3 英文名稱： 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體 0.1ml

EDIL3 英文名稱： 表皮生長因子樣重復(fù)折疊1結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體 0.2ml

嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗體 Anti-CD177/NB1 0.1ml

Anti-VDAC/FITC 熒光素標(biāo)記電壓依賴性陰離子通道抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-GSK-3 Beta(Ser21+Ser29) 磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗體 規(guī)格 0.1ml

CD46/MCP(membrane cofactor protein)rat, mouse 膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg