可逆FAK和Pyk2激酶抑制劑(PF-562271)

可逆FAK和Pyk2激酶抑制劑(PF-562271)公司正在出售的產(chǎn)品：Ang- I (Mouse angiotension I ) ELISA Kit 小鼠血管緊張Ⅰ鎂 99%，用于分子生物學(xué)
MC Ab(Mouse melanocyte antibody) ELISA Kit 小鼠黑色抗體酚試劑 AR,98.0%
T4(Mouse thyroxine) ELISA Kit 小鼠狀腺化錳,

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
樺剝管孔菌羅丹明標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAF3 Antibody二-N-乙酰殼二糖(CTBS)

海馬齒平臍蠕孢FITC標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAF5 Antibody耳椎蛋白90(OC90)

異常威克漢姆酵母堿性磷（AP）標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAF6 Antibody耳纖維源性蛋白(OTOR)

類阿達(dá)青霉膠體金標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAM1 Antibody耳蝸蛋白(OTOS)

粘質(zhì)沙雷氏菌Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAF7 Antibody耳石蛋白1(OTOL1)

苜蓿中華根瘤菌生物標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAM2 Antibody耳錨蛋白(OTOA)

毛云芝辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-Transketolase/TKT Antibody耳膠蛋白(OTOG)

艾阿華諾卡氏菌Cy3標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TREM1 Antibody耳畸蛋白(OTOF)

乳酒假絲酵母Cy5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TREM1 Antibody耳蝶呤3(OTOP3)

蜜蜂生球擬酵母APC標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TREM1 Antibody耳蝶呤2(OTOP2)

漏斗棱孔菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TREM1 Antibody耳蝶呤1(O)

枯草芽孢桿菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TRAP1 Antibody兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移(COMT)

食品檢測(cè)用O157:H7大腸埃希氏菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗豚鼠IgMAnti-TREM1 Antibody鱷失調(diào)蛋白(ATCAY)

泡盛曲霉辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗馬IgGAnti-TREM1 Antibody腭/肺/鼻上皮癌關(guān)聯(lián)蛋白(PLUNC)

盾殼霉生物標(biāo)記的兔抗馬IgGAnti-TREML1 Antibody惡性腦腫瘤缺失蛋白1(DMBT1)

糖多孢菌(可訂)APC標(biāo)記的兔抗馬IgGAnti-TREX1 Antibody多藥耐藥關(guān)聯(lián)蛋白1(MRP1)

蛋白磷2C抗體德氏乳桿菌乳亞種（萊氏曼氏乳桿菌）人體肺癌組織提取物

脫氫激亞型2抗體斯氏李斯特氏菌人體乳腺癌組織源組織提取物

環(huán)指蛋白3抗體乳乳球菌乳亞種人體甲狀腺癌組織源組織提取物

蛋白激A受體2α亞基抗體Chryseobacteriumjeonii人體膀胱癌組織源細(xì)胞
可逆FAK和Pyk2激酶抑制劑(PF-562271)粗柄羊肚 羥基丹參酮IIA

嗜冷海桿 3alpha-羥基丹參酮IIA

假諾卡氏 25(S)-羥基原人參三

釀酒酵母 25(R)-羥基原人參二

蒼白桿屬 3-羥基亞甲基丹參醌

茄鏈格孢 2alpha-羥基澤蘭內(nèi)酯

動(dòng)物雙歧桿 石杉?jí)A

彩色豆馬勃 豆腐果新苷B

多粘類芽胞桿 豆腐果新苷A

江西諾卡氏 銀杏酸C15:0

愛媛類芽孢桿 鹽酸

蒼白鹽八疊球 1,2-二氫丹參醌

枯草芽孢桿 丹參新醌D

雜色曲霉 丹參新醌C

白僵 丹參新醌B