GSK-3β抑制劑(IM-12)

GSK-3β抑制劑(IM-12)公司*的產(chǎn)品：Anti-VIP/FITC 熒光素標(biāo)記血管活性腸肽抗體蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
ChRM3 peptide 毒蕈堿型乙酰膽堿受體M3抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
細(xì)胞毒性受體NK-p44抗體 Anti-CD336/NKp44/NCR2 0.1ml
SOX22

公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

產(chǎn)品屬性：

中文名稱(chēng)：GSK-3β抑制劑(IM-12)

英文名稱(chēng)：IM-12

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

發(fā)貨周期：1～3天

商品介紹：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

鐮刀菌Bacillus sp.豬血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)

蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種Yangia pacifica豬凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)

黑曲霉Paenibacillus amylolyticus豬凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)

鏈格孢菌Brevibacillus centrosporus豬B淋巴瘤因子2(Bcl-2)

波羅的海西瓦氏菌Brevibacillus borsensis豬B淋巴瘤因子2(Bcl-2)

米曲霉Paenibacillus curdanolyticus豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)

*匍枝根霉Paenibacillus illinoisensis豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)

四川散斑殼Desulfomicrobium baculatum豬(HYD)

檸檬明串珠菌Halobacillus locisalis豬(HYD)

野油菜黃單胞菌棲青莧致病變種Xanthobacter aminoxidans豬一氧化氮(NO)

科羅多擬無(wú)枝菌Xanthobacter tagetidis豬一氧化氮(NO)

Brenneria salicisVibrio shilonii豬內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)

新疆交替紅色桿菌Arthrobacter sp.豬內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)

Lonsdalea quercina subsp. quercinaSphingomonas sp.豬內(nèi)皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)

局限曲霉Brevibacterium sp.豬內(nèi)皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)

頭孢霉屬Arthrobacter sp.豬血管生成2(ANG-2)

琥珀脫氫復(fù)合體亞基A抗體紅曲波莫納沙門(mén)氏菌

山梨脫氫抗體葫蘆科刺盤(pán)孢(西瓜炭疽病菌、黃瓜炭疽病菌)基桑加尼沙門(mén)氏菌

突觸樣蛋白5亞型2抗體串珠鐮孢(稻惡苗病菌)布瓦約沙門(mén)氏菌

S100鈣結(jié)合蛋白A11抗體頂孢木霉格伯捷斯沙門(mén)氏菌
GSK-3β抑制劑(IM-12)STK2 英文名稱(chēng)： 絲酸/蘇酸蛋白激酶2抗體 0.2ml

EBNA 3A 英文名稱(chēng)： EB病毒核抗原-3A抗體 0.2ml

半胱胺酸蛋白酶蛋白-6抗體(C端) Anti-Caspase-6 0.1ml

Anti-Phospho-Tyk2 (Tyr1054/1055)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化非受體酪氨酸蛋白激酶2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-HRH1(Ser398) 磷酸化組胺受體H1抗體 規(guī)格 0.1ml

CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 單核細(xì)胞趨化蛋白5抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg