商品介紹:
FAS-IN-1tosylate是高效的脂肪酸合酶FAS抑制劑,來自WO2012064642A1化合物實例29。IC50值為10nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 分子量:649.78 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
紫色直絲鏈霉菌Candida fukuyamaensis
秀珍菇Bensingtonia sorbi
節(jié)桿菌屬Candida fukuyamaensis
香菇Bensingtonia changbaiensis
中國漢納酵母Bensingtonia sorbi
黑曲霉Bensingtonia changbaiensis
干酪乳桿菌Bensingtonia changbaiensis
鹵水糖螺菌Candida colliculosa
漢遜德巴酵母Kazachstania aerobia
鐘器腐霉Candida asparagi
柑橘青霉Kazachstania aerobia
北京芽孢桿菌Candida diospyri
黑根霉Candida qinlingensis
歐文氏菌屬Geotrichum silvicola
固氮菌Bullera variabilis
大腸埃希菌Bullera variabilis
小鼠骨涎蛋白(BSP)免疫試劑盒磷化凋亡信號調(diào)節(jié)激1抗體人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)
小鼠骨特異性堿性磷B(ALP-B)免疫試劑盒中性膽固酯水解1抗體人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1) 尿囊
小鼠骨特性堿性磷C端肽免疫試劑盒人星形膠質(zhì)抗體人PL7抗體/抗蘇酰tRNA合成(PL7) 尿
小鼠骨特性堿性磷(BALP)免疫試劑盒縮A抗體人PL7抗體/抗蘇酰tRNA合成(PL7) 檸檬苦
脂肪酸合酶FAS抑制劑(FAS-IN-1 Tosylate)STIP1 英文名稱: 應(yīng)激誘導(dǎo)磷蛋白1抗體 0.2ml
Endomucin 英文名稱: 內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體 0.2ml
肺癌阻抑基因1抗體 Anti-TSLC1 0.2ml
Anti-TRH/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素釋放激素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-IRAK1 (Thr387) 磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體 規(guī)格 0.1ml
CA15-3 peptide 癌相關(guān)抗原抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg