DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)抑制劑（DC_517）

DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)抑制劑（DC_517）公司*的產(chǎn)品：Anti-Phospho-c-Kit (Tyr703) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化原癌基因c-kit抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Anti-Guinea IgM 兔抗豚鼠IgM (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格： 1mg
葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋

商品介紹：

產(chǎn)品屬性：

中文名稱(chēng)：DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)抑制劑（DC_517）

英文名稱(chēng)：DC_517

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

枯草芽孢桿菌Pseudomonas sp.

蘇云金芽胞桿菌殺蟲(chóng)亞種Pseudomonas sp.

串珠鐮孢Pseudomonas agarici

Sphingopyxis marinaPseudomonas stutzeri

梅奇酵母Pseudomonas pseudoalcaligenes

黑曲霉Burkholderia gladioli

球孢白僵菌Ralstonia eutropha

游動(dòng)微菌Pseudomonas aeruginosa

卵孢木霉Pseudomonas aeruginosa

變形桿菌（普通變形桿菌）49027Pseudomonas aeruginosa

猴頭菌—常山99Pseudomonas mendocina

球孢白僵菌Pseudomonas luteola

布魯氏菌Burkholderia vietnamiensis

藍(lán)微褐鏈霉菌Ralstonia eutropha

副豬嗜血桿菌Pseudomonas mendocina

博爾扎諾鞘盒菌Achromobacter xylosoxidans

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

泰坦尼克號(hào)鹽單胞菌Halomonas│titanicae 質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定

芽胞桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)抑制劑（DC_517）Shiga-Like Toxin Type II Variant 英文名稱(chēng)： 豬水腫素(O139)菌體蛋白抗體 0.2ml

ET-1 英文名稱(chēng)： 內(nèi)皮素-1抗體 0.2ml

神經(jīng)生長(zhǎng)因子-β抗體 Anti-NGF-β 0.1ml

Anti-PILR Beta/FDFACT/FITC 熒光素標(biāo)記Ⅱ型成對(duì)免疫球蛋白樣受體β蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-p70 S6 Kinase Beta 2 (Tyr389) 磷酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體 規(guī)格 0.1ml

5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 3a) 5-羥色胺受體3抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg