公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Aurora抑制劑(PF-03814735)
英文名稱:PF-03814735
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
PF-03814735是可逆的Aurora抑制劑,對Aurora A,Aurora B,F(xiàn)lt1和FAk的IC50分別為0.8,5,10和22nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:942487-16-3 純度:99.24% 分子量:474.48 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
海洋桿菌熒光PE標(biāo)記豬胰島蛋白Anti-IKBKB Antibody人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)
蔥色串孢熒光PE標(biāo)記血藍(lán)蛋白Anti-IKZF2 Antibody人抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)
釀酒酵母熒光PE標(biāo)記人血白蛋白Anti-IKBKG Antibody人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)
單核增生科斯特氏菌熒光PE標(biāo)記胰糜蛋白Anti-IKZF3 Antibody人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)
柱狀田頭菇(茶樹菇、楊樹菇)熒光APC標(biāo)記小鼠IgG(流式同型對照)Anti-IL11RA Antibody人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體
黑曲霉熒光APC標(biāo)記大鼠IgG(流式同型對照)Anti-IL12A Antibody人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體
溶組織梭菌熒光APC標(biāo)記牛IgGAnti-IL13RA1 Antibody人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)
立枯絲核菌熒光APC標(biāo)記牛IgMAnti-IL15RA Antibody人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)
枯草芽孢桿菌枯草亞種熒光APC標(biāo)記雞IgGAnti-IL17B Antibody人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)
甘蔗鐮孢熒光APC標(biāo)記雞IgMAnti-IL17F Antibody人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)
鏈格孢熒光APC標(biāo)記狗IgGAnti-IL18R1 Antibody人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)
哈氏弧菌熒光APC標(biāo)記狗IgMAnti-IL18 Antibody人抗硬皮病抗體70(SCL70/topoⅠ)
辣椒枯萎熒光APC標(biāo)記羊IgMAnti-IL18RAP Antibody人抗SS-B/La抗體
長裙竹蓀熒光APC標(biāo)記豚鼠IgGAnti-IL19 Antibody人抗SS-B/La抗體
炭疽芽胞桿菌熒光APC標(biāo)記豚鼠IgMAnti-IL1B Antibody人落葉型天皰瘡抗體(PF)
食品檢測用副溶血性弧菌熒光APC標(biāo)記馬IgGAnti-IL1A Antibody人落葉型天皰瘡抗體(PF)
維甲受體G抗體紅色紅曲霉小鼠腹水瘤細(xì)胞
視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤樣蛋白2抗體玉蜀黍長蠕孢小鼠前胃癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記)
RANGTPase激活蛋白1抗體銀白楊盤長孢人乳腺癌細(xì)胞(紅色熒光蛋白標(biāo)記)
維甲誘導(dǎo)蛋白17抗體盤長孢菌(魯保一號)人乳腺癌細(xì)胞(上皮粘性蛋白基因修飾)
Aurora抑制劑(PF-03814735)枯草芽孢桿 四氫鴨腳木堿
柱孢 Taxiphyllin
Escherichia Taxifolin 3-O-xyloside
Rhizobium 圓葉腫柄菊 A
茯苓 二乙酸丁香樹脂酯
白地霉 Subelliptenone G
宛氏擬青霉 異長春花苷內(nèi)酰
融粘帚霉 Stigmastane-3β,5α,6β-triol
擬復(fù)瓣革 千金藤堿
爾斯伯酵母 三十碳六烯-2,3-二
間型彎孢 Sorghumol
尖孢鐮孢 Smyrindioloside
上升島鏈霉 Simonsinol
大腸桿 西米杜鵑酮
蠟樣芽孢桿 Shoreic acid