中性鞘磷脂酶抑制劑(GW4869)

商品介紹：
GW4869是非競爭性的中性鞘磷脂酶抑制劑，IC50值為1μM。
注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！
CAS號(hào)：6823-69-4
純度：96.35%
分子量：577.5
儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：中性鞘磷脂酶抑制劑(GW4869)
英文名稱：GW4869
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5

商品介紹：

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：中性鞘磷脂酶抑制劑(GW4869)

英文名稱：GW4869

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

蛋白聚糖4(PRG4)ELISA Kit英文名稱：PRG4 ELISA Kit磷化自噬相關(guān)蛋白3抗體包裝5g

蛋白激B(PKB)ELISA Kit英文名稱：PKB ELISA Kit縮2抗體包裝1g

蛋白激A(PKA)ELISA Kit英文名稱：PKA ELISA Kit胰腺α淀粉抗體包裝25g

蛋白C(Protein C)ELISA Kit英文名稱：Protein C ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體包裝5g

膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)ELISA Kit英文名稱：CCK ELISA Kit磷化非受體酪激c-Abl抗體包裝100mg

膽囊收縮(CCK)ELISA Kit英文名稱：CCK ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝100mg

膽堿乙酰轉(zhuǎn)移(ChAT)ELISA Kit英文名稱：ChAT ELISA Kit固還原家族1成員D1抗體包裝25g

膽堿磷甘油酯(PC/CPG)ELISA Kit英文名稱：PC/CPG ELISA Kit肝血管生成相關(guān)蛋白抗體包裝5g

膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA Kit英文名稱：CETP ELISA Kit自解結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體包裝25g

膽固(CH)ELISA Kit英文名稱：CH ELISA Kit?；蝓?包裝5g

單核細(xì)胞趨化蛋白5(MCP-5)ELISA Kit英文名稱：MCP-5 ELISA Kit溶血磷脂酰基轉(zhuǎn)移β抗體包裝25g

單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA Kit英文名稱：MCP-4/CCL13 ELISA KitAFP4b蛋白抗體包裝5g

單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA Kit英文名稱：MCP-3/CCL7 ELISA Kit載脂蛋白C2抗體包裝100g

單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA Kit英文名稱：MCP-2/CCL8 ELISA Kit載脂蛋白A5抗體包裝25g

單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)ELISA Kit英文名稱：MCP-1 ELISA Kit載脂蛋白A2抗體包裝5g

凋亡蛋白活性因子-1抗體（N端）結(jié)締組織生長因子(CTGF)CGK733 是一種有效的 ATM/ATR 抑制劑，用于癌癥研究。
中性鞘磷脂酶抑制劑(GW4869)雙鏈RNA腺苷脫抗原（N端）磺吉米沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

雙鏈RNA腺苷脫抗原磺加貝酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

質(zhì)金屬蛋白9磺羅（標(biāo)準(zhǔn)品）Human

牛結(jié)核桿菌菌體蛋白磺帕珠沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

Muellerian抑制因子抗原磺培氟沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）Human

AEG-1抗原磺齊拉西（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse

血小板內(nèi)皮黏附分子-1（抗原）磺伊馬替尼（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗原斑蝥（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1丁香酚（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat