以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
JAK2抑制劑(XL019) | XL019 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
XL019是JAK2選擇性抑制劑,IC50為2.2nM,比對JAK1的抑制性高100倍,有很好的分子生物學和細胞活性。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:945755-56-6 純度:95.0% 分子量:444.53 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
谷棒桿菌Pseudomonas sp.大鼠脂蛋白磷脂A2(Lp-PL-A2)
空腸彎曲桿菌Pseudomonas sp.大鼠熱休克蛋白90(HSP-90)
褶菌目暗黃層孔菌Pseudomonas sp.大鼠熱休克蛋白90(HSP-90)
耐壓希瓦氏菌Pseudomonas sp.大鼠熱休克蛋白70(HSP-70)
大腸埃希氏菌Pseudomonas sp.大鼠熱休克蛋白70(HSP-70)
米曲霉Pseudomonas sp.大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)
丁梭菌Pseudomonas sp.大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)
礦工擬諾氏菌Pseudomonas sp.大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)
里氏木霉Pseudomonas sp.大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)
長柄鏈格孢Pseudomonas sp.大鼠β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)
熒光威克酵母Pseudomonas sp.大鼠β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)
金黑小單孢菌Pseudomonas sp.大鼠周期D3(Cyclin-D3)
節(jié)桿菌Pseudomonas sp.大鼠周期D3(Cyclin-D3)
馬丁枝孢Pseudomonas sp.大鼠周期D2(Cyclin-D2)
禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病Pseudomonas sp.大鼠周期D2(Cyclin-D2)
大腸埃希氏菌O157Pseudomonas sp.大鼠周期D1(Cyclin-D1)
信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體貝葉多孔菌(灰樹花)L-乳(LA)比色法測試盒(測全血)
監(jiān)理蛋白抗體阿魏菇L-乳(LA)比色法測試盒
肺表面活性蛋白A抗體荷葉離褶傘D-木糖比色法測試盒
單羧轉(zhuǎn)運蛋白2抗體裂皮環(huán)柄菌肝/肌糖原比色法測試盒
JAK2抑制劑(XL019)大腸埃希氏 二氫姜黃
黃色籃狀 氧合血紅蛋白
枯草芽孢桿枯草亞種 丹參
紅緣層孔 PUC19質(zhì)粒
膠紅酵母 環(huán)黃芪
畢赤酵母 結合珠蛋白
摩氏摩根氏 β-桉葉
大腸埃希 PUC18質(zhì)粒
皮特不動桿 苯甲酰芍藥苷
多主棒孢(可提供) 蒼術
黃桿 刀豆A
假諾氏 牛蒡苷元
產(chǎn)黃青霉 β-乳球蛋白
彩色豆馬勃 知母皂苷E
蘇云金芽孢桿松躅亞種 纖粘連蛋白