PKC抑制劑(Verbascoside)

PKC抑制劑(Verbascoside)公司正在出售的產(chǎn)品：PDK1(phospho Y373 + Y376) /FITC 熒光標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化3肌依賴(lài)性蛋白激1抗體IgG2-酰吡啶 Standard for GC ,≥99.5% (GC)
Phospho-PDK1 (Ser241) /FITC 熒光標(biāo)記化3肌依賴(lài)性蛋白激1抗體IgG1-己硫 96%
Pdk4/FITC 熒光標(biāo)記酮脫氫

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
均態(tài)諾氏菌人重組激活基因1Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠吡啶交聯(lián)物(PY)

大腸埃希氏菌人NOD樣受體Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠骨橋(OPN)

新月梅奇酵母人視黃誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠骨橋(OPN)

樟疫霉人清道夫受體BBacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)

盞芝小孔菌人殺菌肽BBacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)

E.coli DB3.1人抗菌肽Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠骨特異性堿性磷B(ALP-B)

芭蕉本森頓酵母人顆粒溶Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠骨特異性堿性磷B(ALP-B)

河北鏈霉菌人富組蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)

秦氏蜜環(huán)菌人免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄體受體Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)

大豆慢生根瘤菌人絲狀血球凝集Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠半胱蛋白抑制劑/胱抑C(Cys-C)

諾爾斯氏鏈霉菌人絨毛蛋白/埃茲蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠半胱蛋白抑制劑/胱抑C(Cys-C)

產(chǎn)氮假單胞菌人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)ABacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)

釀酒酵母人肌養(yǎng)蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)

鮭色鎖擲酵母人膠原凝集Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠激M2型同工(M2-PK)

小麥全蝕病人伴侶蛋白10Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠激M2型同工(M2-PK)

節(jié)桿菌人纖調(diào)蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠催乳(PRL)

丘腦分泌受體抗體食欲受體偏腫栓菌人胚胎胰腺組織來(lái)源細(xì)胞

少突細(xì)胞髓磷脂糖蛋白抗體紫皮蘑人類(lèi)原巨核細(xì)胞型白血病細(xì)胞

外致密纖維尾部蛋白4抗體橘色硬皮馬勃BALB/C小鼠肝上皮細(xì)胞

一氧化氮合成-1抗體神經(jīng)型棕灰口蘑恒河猴胚腎細(xì)胞
PKC抑制劑(Verbascoside)兔出血癥病 

大腸埃希氏 女貞苷

熱帶假絲酵母 滿霉

釀酒酵母 23-羥基白樺酸

羊泰勒蟲(chóng)（乾寧株） 托普霉

蘇云金芽孢桿 環(huán)沙星

榛色假單胞 白頭翁皂苷A

釀酒酵母 鹽酸環(huán)沙星

木霉 鹽酸金霉

木防已盤(pán)多毛孢 頭孢氨芐

小炭球 噻孢霉

光帽鱗傘 放線D

豬丹絲 

米根霉 松弛B

玻維亞鹽單胞 佛司可林