ROCK抑制劑(GSK269962A)

ROCK抑制劑(GSK269962A)公司正在出售的產(chǎn)品：Anti-Nebulin/FITC 熒光素標(biāo)記伴肌動(dòng)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-VEGF/RBITC 羅丹明標(biāo)記VEGF抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
血管緊張素Ⅱ受體抗體 Anti-Angiotensin II receptor 0.2m

商品介紹：

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時(shí)內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大內(nèi)皮(Big ET)ELISA Kit英文名稱：Big ET ELISA Kit溶血磷脂?；D(zhuǎn)移D抗體包裝1g

大動(dòng)脈平滑肌肌動(dòng)蛋白α2(Acta2/Actsa/Actvs)ELISA Kit英文名稱：Acta2/Actsa/Actvs ELISA Kit載脂蛋白E3抗體包裝250mg

催乳抑制激(PIH)ELISA Kit英文名稱：PIH ELISA KitABI基因家族2抗體包裝1g

催乳釋放激(PRH)ELISA Kit英文名稱：PRH ELISA Kit氧化蛋白質(zhì)解包裝5g

催乳(PRL)ELISA Kit英文名稱：PRL ELISA Kit鐵調(diào)節(jié)蛋白2抗體包裝500mg

催產(chǎn)(OT)ELISA Kit英文名稱：OT ELISA Kit乙脫氫1型抗體包裝50mg

促有絲分裂因子(MF/MPF)ELISA Kit英文名稱：MF/MPF ELISA KitAFP4a蛋白抗體包裝1g

促性腺激釋放激(GnRH)ELISA Kit英文名稱：GnRH ELISA KitRho GTP激活蛋白32抗體包裝250mg

促生長激釋放激(GHRH)ELISA Kit英文名稱：GHRH ELISA Kit能量平衡相關(guān)蛋白抗體包裝5g

促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子(CRF)ELISA Kit英文名稱：CRF ELISA Kit禽腦脊髓炎病AEV抗體包裝5mg

促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)ELISA Kit英文名稱：ACTH ELISA Kit腺苷環(huán)化7抗體包裝25g

促腎上皮質(zhì)激釋放激(CRH)ELISA Kit英文名稱：CRH ELISA Kit腺苷環(huán)化4抗體包裝5g

促卵泡(FSH)ELISA Kit英文名稱：FSH ELISA Kit腺苷活化蛋白激γ1抗體包裝1g

促狀腺釋放激(TRH)ELISA Kit英文名稱：TRH ELISA Kit芳香N-乙酰化轉(zhuǎn)移抗體包裝1g

促狀腺(TSH)ELISA Kit英文名稱：TSH ELISA Kit腺苷環(huán)化8抗體包裝1g

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同源轉(zhuǎn)錄因子DLX2抗體溴芬鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Cefditoren pivoxil

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橋粒糖蛋白1抗體溴化新斯的明(標(biāo)準(zhǔn)品) Pyrazinamide

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動(dòng)力蛋白激活蛋白1抗體亞培南（標(biāo)準(zhǔn)品） Demeclocycline hydrochloride

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