商品介紹:
AG18(RG-50810;Tyrphostin A23)是EGFR的抑制劑,IC50值為35μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:118409-57-7 別名:RG-50810;Tyrphostin A23 純度:98.04% 分子量:186.17 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
EGFR抑制劑(AG 18) | AG 18 | 1mL(10mM)|10mg|50mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
華根霉信號通路Wnt1抗原Anti-ERAP1 Antibody人H-ras
海岸微小桿菌包含氧化還原的WW域抗原Anti-EPS8L3 Antibody人H-ras
靈芝草X-連鎖凋亡蛋白/性連鎖凋亡抑制蛋白抗原Anti-ERAS Antibody人c-sis
菱形伊薩酵母XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗原Anti-ERAS Antibody人c-sis
大腸埃希氏桿菌X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白/堿基切除修復(fù)基因抗原Anti-ERBB3 Antibody人c-jun
豇豆慢生根瘤菌胞質(zhì)緊密粘連蛋白1抗原Anti-ERBB3 Antibody人c-jun
布魯氏菌ARC(多肽抗原)Anti-ERBB3 Antibody人c-fos
爪哇根霉血管緊張Ⅱ受體(抗原)Anti-ERCC5 Antibody人c-fos
白黃側(cè)耳蛋白激C(多肽抗原)Anti-ERCC4 Antibody人c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)
灰肉色鏈霉菌腎上腺能受體β1(抗原)Anti-ERCC1 Antibody人c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)
球孢白僵菌膜粘連蛋白-5(抗原)Anti-ERF Antibody人Smad1
暗灰鏈霉菌水通道蛋白-4(抗原)Anti-ERGIC3 Antibody人Smad1
唐菖蒲伯克霍爾德氏菌B7-H4(抗原)Anti-ERI1 Antibody人Smad7
糞產(chǎn)堿桿菌*BADH2抗原Anti-ERI1 Antibody人Smad7
白蘭鏈霉菌骨鈣(抗原)Anti-ERLIN1 Antibody人腫瘤相關(guān)抗原(TAA)
鬼傘屬鈣激活通道蛋白Anti-ES8L1 Antibody人腫瘤相關(guān)抗原(TAA)
發(fā)育多能性相關(guān)蛋白3抗體菊糖芽孢乳桿菌人腎透明細(xì)胞癌
血影蛋白A鏈紅細(xì)胞型抗體類紅紅細(xì)菌小鼠漿細(xì)胞瘤
相關(guān)抗原6抗體牙齦卟啉單胞菌人急性原粒細(xì)胞白血病細(xì)胞
亞硫鹽氧化抗體匣狀粘球菌人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞
EGFR抑制劑(AG 18)乳酸乳球乳脂亞種 十九酸甲酯
嗜堿擬諾氏 3-甲
粉狀畢赤酵母 焦磷酸四芐酯
深綠木霉 異香蘭酸
類干酪乳桿 乙酸甲脒
冬青炭疽病 對羥基苯酮
匍枝根霉原變種 咖啡酸
多主葡萄殼 4-甲氧基
黑曲霉 乙酸酯
分散泛(可訂) 3,5-二氟吡啶
三鏈霉 (1S,2S)-1,2-二苯基乙二
灰綠曲霉 2-磺基酐
玉蜀黍尾孢* 1-丁基-3-甲基六氟磷酸鹽咪唑啉嗡
大腸埃希 9,10-菲二酮
半園田頭菇 對羥基苯乙