公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:ALK激酶抑制劑(ALK-IN-1)
英文名稱:ALK-IN-1
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
ALK-IN-1是ALK激酶高效選擇性抑制劑,出自US20140066406A1。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1197958-12-5 純度:99.80% 分子量:529.01 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
谷棒桿菌人著絲粒蛋白BBacillus thuringiensis subsp. tohokuensis小鼠銅藍蛋白(CP/CER)
擬莖點霉人巨噬激蛋白Bacillus thuringiensis subsp. tolworthi小鼠p53(p53)
釀酒酵母人雷帕霉靶蛋白Bacillus thuringiensis subsp. yunnanensis小鼠p53(p53)
蠟樣芽胞桿菌 (蠟狀芽胞桿菌)人核基質(zhì)蛋白22Bacillus vallismortis小鼠環(huán)磷鳥苷(cGMP)
溫特曲霉煙色變種人軟骨寡聚蛋白Bacillus thuringiensis subsp. wenquanensis小鼠環(huán)磷鳥苷(cGMP)
指甲絨隱球酵母人多藥耐藥相關(guān)蛋白Bacillus vedderi小鼠一氧化氮合成(NOS)
檸條根瘤菌人高速泳動蛋白17Escherichia coli小鼠一氧化氮合成(NOS)
假白布勒酵母人空泡相關(guān)蛋白AEscherichia blattae小鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)
枯草芽孢桿菌人玻連蛋白/體外粘連蛋白Escherichia coli小鼠誘導(dǎo)型一氧化氮合成(iNOS)
粗毛栓菌人波形蛋白Escherichia coli小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)
枯草芽胞桿菌人表面活性蛋白DEscherichia coli小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)
強壯類芽孢桿菌人阿伯半乳糖蛋白Escherichia coli小鼠組(HIS)
豬瘟病人β乳球蛋白Escherichia coli小鼠組(HIS)
熒光假單胞菌人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白Escherichia coli小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂A2(Lp-PL-A2)
大葉黃楊炭疽病人淀粉樣前體蛋白Escherichia coli小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂A2(Lp-PL-A2)
炭疽桿菌 (可定)人β2糖蛋白Escherichia coli小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)
神經(jīng)細胞正五聚體1抗體楊盤二孢豚鼠心肌細胞
NADH脫氫黃蛋白2抗體松口蘑小鼠單核巨噬細胞
NADH氧化還原輔1抗體球蓋菇屬人腎曲小管細胞
嗜中性粒細胞胞漿因子1抗體黃粘蓋牛肝菌人腦微血管內(nèi)皮細胞
ALK激酶抑制劑(ALK-IN-1)褪色沙雷氏(粘質(zhì)沙雷氏) 3-[N,N-雙(2-)]氨基-2-羥基磺酸
大腸埃希 N-三(羥甲基)甲-2-羥基磺酸鈉鹽
蘇云金芽孢桿印第安那亞種 土荊皮甲酸
平臍蠕孢 N-三(羥甲基)甲-2-羥基磺酸
黑曲霉 原花青B1
異常畢赤酵母 N-三(羥甲基)甲基-3-氨基磺酸鈉鹽
靈芝 里奧林
糞產(chǎn)堿桿 N-三(羥甲基)甲基-3-氨基磺酸
血紅絨牛肝 羅漢果苷VI
胡椒枯萎病 N-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸鈉鹽
枯草芽孢桿 N-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸
暗孢小克銀漢霉 3-(N-啉)-2-羥基磺酸鈉鹽
硫磺(硫色多孔) 3-(N-啉)-2-羥基磺酸
大腸埃希氏 羅漢果苷IV
豬丹絲 3-(N-啉)磺酸鈉鹽