商品介紹:
Bay59-3074是一個(gè)新的,有選擇性的CB1/CB2受體的激動(dòng)劑,Ki值在CB1和CB2中的KI值分別是48.3nM和45.5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):406205-74-1 純度:98.01% 分子量:453.36 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
層出鐮孢原變種Bacillus firmus
白地霉Bacillus sp.
多主葡萄殼菌Bacillus sp.
大腸埃希氏菌Bacillus halodenitrificans
植物乳桿菌植物亞種Bacillus sp.
蘇云金桿菌武漢亞種Bacillus sp.
阿德長(zhǎng)西氏酵母Bacillus pumilus
耐放射異常球菌Bacillus pumilus
畢赤酵母Bacillus firmus
茶新菇Bacillus sp.
鏈霉菌Bacillus aquimaris
空泡單胞菌Bacillus aquimaris
裂褶菌Bacillus marisflavi
枯草芽孢桿菌Bacillus pumilus
GlaciimonasBacillus sp.
中慢生華癸根瘤菌Bacillus marisflavi
豬二氧化(DAO)免疫試劑盒錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體人基質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12) 大豆皂苷Bb
豬兒茶(CA)免疫試劑盒磷化間變型淋巴瘤激抗體人基質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12) 大豆皂苷Bd
豬多肽YY(PYY)免疫試劑盒?;摎浜荛L(zhǎng)鏈抗體人干因子受體(SCFR)大豆皂苷Be
豬多巴(DA)免疫試劑盒信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接結(jié)合蛋白抗體人干因子受體(SCFR)大豆皂苷Be甲酯
CB1/CB2受體激動(dòng)劑(Bay 59-3074)SGK3 英文名稱: 絲酸/蘇酸蛋白激酶Sgk3抗體 0.2ml
Epigen 英文名稱: 上皮細(xì)胞有絲分裂蛋白抗體 0.2ml
谷氨酸受體2B抗體 Anti-NR2B/NMDAR2B 0.1ml
Anti-SLC34A2/NaPi-2b/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-P53(Ser15) 磷酸化抑制基因P53抗體 規(guī)格 0.1ml
CA125 (Ovarian cancer Anti-gen) 卵巢癌抗原(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg