以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Acyclovir能抑制皰疹病毒的胸苷激酶,IC50為530-750nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:59277-89-3 別名:Aciclovir;Acycloguanosine 純度:98.0% 分子量:225.2 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
柴胡皂苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ilomastat,GM6001,Galardin一氧化氮合成-2抗體(誘導(dǎo)型)包裝5g
柴胡皂苷B1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Guaiacol glycidyl ether干擾α6抗體包裝1g
柴胡皂苷B2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 4-Aminoantipyrine整合β2/Integrin β2抗體包裝250mg
柴胡皂苷B3(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: N-bromosuccinimide抑制A/Inhibin βA抗體包裝1g
柴胡皂苷B4英文名稱: Lysostaphin胰島受體底物-3抗體包裝250mg
柴胡皂苷C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Thymol胰島受體底物p53蛋白抗體包裝25g
柴胡皂苷D(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: sulfo-NHS胰島受體底物-1抗體包裝5g
柴胡皂苷F(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methylene Blue胰島受體底物-2抗體包裝25g
柴胡皂苷G(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Valnemulin HCl胰島受體底物-4抗體包裝5g
柴胡皂苷H(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tylosin phosphate 白介14抗體包裝1g
柴胡皂苷I英文名稱: Levofloxacin HCl腫瘤凋亡ASPP家族的另一個成員抗體包裝25g
蟾靈;蟾酥靈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Levofloxacin HClCaspase激活的脫氧核糖核抑制劑抗體包裝5g
長春里寧英文名稱: Bismarck Brown R胰島受體α抗體包裝5MG
長春新堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tylosin Tartrate整合α3β1抗體包裝1g
常春藤苷C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tylosin Tartrate整合β7抗體包裝250mg
伊氏錐蟲Trypanosoma│evansi 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1試劑盒黃獨(dú)B;Diosbulbin B
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,選擇性的PARP1/2抑制劑可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物試劑盒葫蘆B;cucurbitacin B
施氏假單胞菌Pseudomonas│stutzeri 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,BR可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體試劑盒胡麻屬苷;Sesamoside
胸苷激酶抑制劑(Acyclovir)有脊椎動物腦發(fā)育相關(guān)蛋白Emx1抗體乙酰霉(標(biāo)準(zhǔn)品) CAPE (Caffeic Acid Phenethylester)
外胚層神經(jīng)皮層蛋白1抗體乙酰螺旋霉(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulfameter
烯化超家族成員1抗體乙酰左旋肉鹽鹽(標(biāo)準(zhǔn)品) Amitraz
核苷內(nèi)焦磷/磷二酯1抗體乙氧柳(標(biāo)準(zhǔn)品) Amitraz
內(nèi)皮活化蛋白受體抗體異安替比林(標(biāo)準(zhǔn)品) Citric acid monohydrate
效應(yīng)蛋白受體1抗體異托溴銨(標(biāo)準(zhǔn)品) Salubrinal
早期內(nèi)吞體相關(guān)蛋白1抗體異丁司特(標(biāo)準(zhǔn)品) Primaquine phosphate
胞吞調(diào)控蛋白Eps15抗體異環(huán)磷酰(標(biāo)準(zhǔn)品) D-(-)-Luciferin
真核翻譯起始因子4E抗體異環(huán)磷?;衔颕II(標(biāo)準(zhǔn)品) Marbofloxacin