商品介紹:
Zidovudine是一種核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTI),廣泛用于治療HIV感染。Zidovudine增強(qiáng)CRISPR/Cas9調(diào)節(jié)的編輯頻率。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):30516-87-1 別名:Azidothymidine;AZT;ZDV 純度:99.96% 分子量:267.24 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
丹皮酚原苷;牡丹酚原甙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Wilforlide A免疫球蛋白結(jié)合蛋白-1抗體包裝25g
丹葉大黃英文名稱: Forsythoside E胰島樣生長(zhǎng)因子不穩(wěn)定亞基ALS抗體包裝5g
丹葉大黃-3'-O-葡萄糖苷英文名稱: Rotundine/ L-Tetrahydropalmatine豬胰島單克抗體包裝1g
丹芝B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: EGCG, (-)-Epigallocatechin gallate/Green Tea ExtractKB抑制蛋白激α/IκBα/IKK-α/IKKα/I-κB-α 抗體包裝5g
單白前苷B英文名稱: Deoxycholic acid抗重組人胰島抗體包裝5g
膽固(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Calcein-AM 磷化肌聚磷鹽磷樣蛋白1抗體包裝25g
膽紅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nicotinamide胰島受體抗體包裝5g
膽木(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: cucurbitacins胰島受體α抗體包裝1g
膽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-Hydroxytryptophan(5-HTP)胰島受體β抗體包裝5g
淡豆豉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 5-HydroxytryptophanKB抑制蛋白激α/β抗體包裝10mg
蛋黃磷脂酰膽堿英文名稱: Imazapyr acid白介12抗體包裝250mg
當(dāng)歸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Imazapyr acid干擾誘導(dǎo)35蛋白抗體包裝100ml
當(dāng)歸尾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lithocholic Acid完整膜蛋白E25A抗體包裝1g
當(dāng)歸酰基戈米辛H(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Potassium Oxonate小腸型脂肪結(jié)合蛋白抗體包裝5g
當(dāng)歸?;昝仔?/span>O英文名稱: Potassium Oxonate胰島降解抗體包裝1g
多刺鏈霉菌Streptomyces│echinatus 質(zhì)量規(guī)格:≥90.0%,BRELISA Kit漢黃芩苷;Wogonoside
脫氮卓貝爾氏菌Zobellella│denitrificans 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,二合物顆粒體蛋白試劑盒黃芩;Baicalein
猴頭菌Hericium│erinaceus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品顆粒溶試劑盒黃豆黃苷; Glycitin
NRTI抑制劑(Zidovudine)預(yù)鋇鹽,一水
重鉻(VI)鋰,二水
大理石
鈣硝石
孔雀石
天青石
硝石
保棉磷
赤磷