B細(xì)胞受體抑制劑(ONO-4059 hydrochloride)

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：
中文名稱英文名稱產(chǎn)品規(guī)格發(fā)貨周期
ONO-4059 hydrochloride1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg1～3天

商品介紹：
ONO-4059的IC50值是2.2nm，是一種有選擇性和新穎的抑制劑。在B細(xì)胞中ONO-4058結(jié)合BTK，因此阻止B細(xì)胞受體信號(hào)和阻礙B細(xì)胞的發(fā)展。
注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時(shí)內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis subsp. subtilis

柑橘炭疽盤孢Bacillus subtilis subsp. subtilis

枯草芽孢桿菌Bacillus alvei

解淀粉芽胞桿菌Bacillus alvei

固氮野野村氏菌Bacillus anthracoides

灰黃青霉Bacillus anthracoides

大腸埃希菌Bacillus lichenitormis

杰氏假單胞菌Bacillus megaterium

擬枝孢鐮孢Bacillus megaterium

MarisediminicolaBacillus thuringiensis

炭黑曲霉Bacillus sp.

根瘤菌Bacillus thuringiensis subsp. galleriae

莫哈韋芽孢桿菌Bacillus thuringiensis

金針12Bacillus thuringiensis subsp. galleriae

細(xì)枝農(nóng)霉菌Bacillus subtilis subsp. subtilis

呼倫貝爾無色需堿菌Bacillus subtilis subsp. subtilis

磷化酪磷α抗體薄樹靈芝飼料類芽孢桿菌

磷化端粒結(jié)合蛋白P23抗體新日本靈芝人皰疹病毒2型

磷化蛋白酪激9抗體擬革蓋菌人輪狀病毒

磷化蛋白激C/p-PKCε抗體卷邊網(wǎng)褶菌極梅奇酵母
B細(xì)胞受體抑制劑(ONO-4059 hydrochloride)SDCCAG10 英文名稱： 結(jié)腸癌抗原10抗體 0.2ml

ERCC6L 英文名稱： 發(fā)育相關(guān)蛋白ERCC6L抗體(乙醇致畸因子) 0.2ml

一種抑制基因 Anti-PTEN/MMAC1 0.1ml

Anti- Alpha-Synuclein/FITC 熒光素標(biāo)記核突觸蛋白-α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Met(Tyr1234/1235) 磷酸化肝細(xì)胞生長因子受體(原癌基因)抗體 規(guī)格 0.1ml

HIV gp120 艾滋病病毒(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg