以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Pyrimethamine(RP4753)可通過抑制二氫葉酸還原酶(DHFR)干擾四氫葉酸的合成,可作用于原生動物的感染。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:58-14-0 別名:Pirimecidan;Pirimetamin;RP 4753 純度:99.93% 分子量:248.71 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
沉香四英文名稱: PLX-4720白介-17抗體包裝1g
陳皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1,1'-Carbonyldiimidazole白介-18/干擾γ誘導(dǎo)因子抗體包裝100g
陳皮炭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: LY2835219白介1受體相關(guān)蛋白樣1前體蛋白抗體包裝500g
橙黃決明(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: LEE011白介1β/IL-1β抗體包裝100ml
橙皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MG-132白介2抗體(大、小鼠)包裝25g
橙皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dictamnine白介-2單克抗體包裝5g
橙皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Rotigotine白介-23抗體包裝1g
匙羹藤苷元英文名稱: Rotigotine Hydrochloride白介4抗體包裝5g
匙羹藤新苷元英文名稱: Dexrazoxane HCl白介6包裝100g
匙羹藤葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: SGI-1776;SGI1776白介6抗體包裝25g
匙羹藤皂苷C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: JNJ 26854165白介6抗體包裝5g
赤脛散(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: SB-505124抑制A/Inhibin α抗體包裝25g
赤芍(川赤芍)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: NLG-919雞傳染性喉氣管炎病糖蛋白E抗體包裝5g
赤芍(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vismodegib;GDC-0449小腸型脂肪結(jié)合蛋白抗體包裝1g
赤式-2-(4-烯基-2,6-二氧基氧基)-1-...英文名稱: LY-335979白介-7受體a抗體包裝25g
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%,BR可溶性核因子κB受體活化因子試劑盒荷葉堿;Nuciferine
柑桔鏈格孢Alternaria│citri 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,單合物可溶性淀粉前體蛋白α試劑盒黃決明;Chrysoobtusin
瑟氏泰勒蟲(遼陽株)Theileria│sergenti 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)可溶性彈性蛋白片段試劑盒紅景天苷;Salidroside
DHFR抑制劑(Pyrimethamine)有絲分裂激A抗體晚期糖化終末產(chǎn)物(AGEs)檢測試劑盒AGEs ELISA Kit
干擾誘導(dǎo)蛋白AIM2抗體脫氧膠原吡啶交聯(lián)(DPD)檢測試劑盒DPD ELISA Kit
水通道蛋白-2抗體脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)檢測試劑盒DPD ELISA Kit
腫瘤抑制因ABI2/精酪蛋白激結(jié)合蛋白抗體脫氫表雄硫酯(DHEA-S)檢測試劑盒DHEA-S ELISA Kit
ADP核糖化因子樣11抗體脫氫表雄S7(DHEA-S7)檢測試劑盒DHEA-S7 ELISA Kit
ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX3抗體脫氫表雄(DHEA)檢測試劑盒DHEA ELISA Kit
ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX1抗體褪黑(MT)檢測試劑盒MT ELISA Kit
ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX2抗體突觸融合蛋白2(STX2)檢測試劑盒STX2 ELISA Kit
自噬相關(guān)蛋白10抗體突觸融合蛋白1A(STX1A)檢測試劑盒STX1A ELISA Kit