商品介紹:
Boceprevir是一種有效的選擇性的HCV NS3protease抑制劑,酶實(shí)驗(yàn)中Ki為14nM,在含細(xì)胞體系的復(fù)制實(shí)驗(yàn)中,EC90為350nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:394730-60-0 別名:EBP 520;SCH 503034 純度:97.36% 分子量:519.68 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
麥冬皂苷D(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lauric acidG蛋白偶聯(lián)膽汁受體1包裝5g
麥角甾;麥角固(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Nervonic acid葡萄糖6-磷脫1抗體包裝1g
麥芽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pentadecanoic Acid葡萄糖6-磷脫2抗體包裝1g
滿山白(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (+)-Pantothenic acid calcium salt hydrate葡萄糖6-N-乙?;D(zhuǎn)移1抗體包裝250mg
滿山紅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Potassium sorbate谷酰1抗體包裝5g
蔓荊子黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pentadecafluorooctanoic acidG蛋白偶聯(lián)受體GPR161蛋白抗體包裝1g
芒果苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: n-Octanoic acidG蛋白偶聯(lián)受體GPR180蛋白抗體包裝5g
芒果葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ricinoleic acidG蛋白通路抑制物蛋白2抗體包裝1g
莽草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Stearic acidG蛋白偶聯(lián)受體GPR177蛋白抗體包裝5g
貓爪草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sodium CyclamateG蛋白偶聯(lián)受體GPR89A蛋白抗體包裝5ml
毛大丁草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-(-)-SorboseG蛋白偶聯(lián)受體GPRSP2蛋白抗體包裝100g
毛冬青(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Saccharin sodium salt hydrateG蛋白偶聯(lián)受體GPRC5C蛋白抗體包裝25g
毛冬青皂苷A英文名稱: Iodine solutionG蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白α14/Gα 14 抗體包裝5g
毛萼結(jié)晶;毛萼晶A英文名稱: Iodine solutionG蛋白β樣蛋白抗體包裝25ml
毛萼乙英文名稱: Scandium standardG蛋白β5/Gβ 5 抗體包裝5ml
淺灰鏈霉菌Streptomyces│griseolus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR葡萄糖激調(diào)節(jié)蛋白試劑盒綿馬貫眾ABBA;Dryocrassi
鐮孢屬Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品葡萄糖激試劑盒牡荊葡萄糖苷;glucosylvite
外皮毛霉Mucor│hiemalis f. corticola (Hagem) Schipper 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,BR,可用于培養(yǎng)葡萄糖6磷異構(gòu)試劑盒牡荊鼠李糖苷;Vitexin rham
HCV NS3protease抑制劑(Boceprevir)羊抗雞IgG抗血清縮二脲 Biuret >98.0%(N)Human
小鼠抗人IgG腹水聯(lián)二脲 BiureaHuman
小鼠抗羊IgG腹水N,O-雙(三硅烷)乙酰 N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide >75.0%(GC)Human, Mouse
小鼠抗兔IgG腹水N,O-雙(三硅烷)乙酰 N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide >75.0%(GC)Human
小鼠抗大鼠IgG腹水N,O-雙(三硅烷)乙酰(25%的乙溶液)[三硅化劑,用于化合物] N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide (25% in Acetonitrile)[Trimethylsilylating Reagent, for NH2 compounds]Human
小鼠抗牛IgG腹水1,4-雙[2-(5-惡唑)][用于閃爍光譜法] 1,4-Bis[2-(5-phenyloxazolyl)]benzene [for scintillation spectrometry]>98.0%(LC&N)Human, Mouse
兔抗親和抗血清1,4-雙[2-(5-惡唑)][用于閃爍光譜法] 1,4-Bis[2-(5-phenyloxazolyl)]benzene [for scintillation spectrometry]>98.0%(LC&N)Human, Mouse, Rat
兔抗生物抗血清1,4-雙[2-(5-惡唑)][用于閃爍光譜法] 1,4-Bis[2-(5-phenyloxazolyl)]benzene [for scintillation spectrometry]>98.0%(LC&N)Human, Mouse, Rat
兔抗牛IgM抗血清雙(3--1--5-吡唑啉)[用于硝棉,維生B12等的測定] Bis(3-methyl-1-phenyl-5-pyrazolone) [for Determination of CN, Vitamin B12, etc]>97.0%(T)Human, Rat