Pim1/2和3激酶抑制劑(CX-6258)

公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：Pim1/2和3激酶抑制劑(CX-6258)

英文名稱：CX-6258

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天

商品介紹：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

釀酒酵母Lactobacillus plantarum兔子腫瘤壞死因子α(TNF-α)  

季也蒙畢赤酵母Paenibacillus macquariensis兔子脂聯(lián)(ADP)

青黃馬杜放線菌Lactobacillus plantarum兔子脂聯(lián)(ADP)

瘍殼孢屬Delftia acidovorans兔腎(Renin)

芽胞桿菌屬Serratia marcescens兔腎(Renin)

Bacillus tequilensisAncylobacter sp.兔子胰島樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)

大腸埃希氏菌Spirosoma linguate兔子胰島樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)

黑曲霉Flectobacillus major兔子胰島樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)

長(zhǎng)柄平菇Spirosoma linguale兔子胰島樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)

谷棒桿菌Ancylobacter vacuolatus兔子胰島(INS)

短桿狀馬賽菌Bifidobacterium animalis subsp. lactis兔子胰島(INS)

擬莖點(diǎn)菌Alcanivorax borkumensis兔子氧化低密度脂蛋白(OxLDL)

阿舒假囊酵母Clostridium sporogenes兔子氧化低密度脂蛋白(OxLDL)

釀酒酵母Arthrobacter uratoxydans兔子補(bǔ)體蛋白4(C4)

球孢白僵菌Serratia marcescens兔子補(bǔ)體蛋白4(C4)

香菇(林研6號(hào))Lactobacillus pantheris兔子血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A蘇云金芽胞桿菌莫里遜亞種維爾肖沙門氏菌

小鼠抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A抗體蘇云金芽胞桿菌巴基斯坦亞種杜塞爾多夫沙門氏菌

嗜鉻顆粒胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白VAT1抗體雙歧桿菌塔哈西沙門氏菌

粘著斑蛋白抗體尖鐮孢西瓜?；?/span>(西瓜枯萎病菌)（斜面）爪哇那沙門氏菌
Pim1/2和3激酶抑制劑(CX-6258)珠頭霉 碳酸酐（牛紅血球）

釀酒酵母 甜菜堿

糞腸球 谷氨酰轉(zhuǎn)移

香菇 纖維透析袋（500-1000）

多主葡萄殼 復(fù)合蛋白

扣囊復(fù)膜孢酵母 鼠李糖

炭疽芽胞桿 風(fēng)味