Src抑制劑（KX2-391 dihydrochloride）

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細(xì)胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時(shí)內(nèi)檢測）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

仁果叢梗孢Brevibacillus laterosporus兔子血小板衍生生長因子(PDGF)

亮白曲霉Lactobacillus acidophilus兔過氧化物體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)

膠孢Lactococcus lactis subsp. lactis兔過氧化物體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)

枯草芽孢桿菌Acetobacter pasteurianus兔子血小板活化因子(PAF)

枯草芽孢桿菌Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus兔子血小板活化因子(PAF)

腸膜明串珠菌葡聚糖亞種Stenotrophomonas maltophilia兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)

假單胞菌Lactobacillus manihotivorans兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)

孢小克銀漢霉輪生變種Ralstonia pickettii兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)

炭角菌*Ralstonia pickettii兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)

凝結(jié)芽孢桿菌 Stenotrophomonas maltophilia兔子纖溶原激活物抑制因子(PAI)

傷口埃希氏菌Achromobacter xylosoxidans兔子纖溶原激活物抑制因子(PAI)

赭褐鏈霉菌Ralstonia solanacearum兔子纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)

寡養(yǎng)單胞Burkholderia cepacia兔子纖溶原激活物抑制因子1(PAI-1)

亞灰光柄菌Lactobacillus reuteri兔子間粘附分子3(ICAM-3/CD50)

香菇Burkholderia cepacia兔子間粘附分子3(ICAM-3/CD50)

哈茨木霉Stenotrophomonas maltophilia兔子葡萄糖依賴性胰島釋放多肽(GIP)

血管內(nèi)皮生長因子抗體變黑輪枝菌厄班那沙門氏菌

上皮型鈣粘附分子抗體謝瓦散囊菌阿德萊德沙門氏菌

血管內(nèi)皮生長因子B167膠胞韋克羅斯沙門氏菌

血管內(nèi)皮生長因子B葡萄炭疽病菌維斯哥沙門氏菌
Src抑制劑（KX2-391 dihydrochloride）釀酒酵母 對(duì)-N-乙酰-α-D-氨基葡萄糖苷

硬水黃桿 鹽酸育亨賓

柔嫩艾耳球蟲 對(duì)-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷

芽孢桿 纖維透析袋（100-500）

 維氏氣單胞 木糖

矮小青霉 n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷

金黃殼囊孢 七葉皂苷鈉

枯草芽孢桿 鄰-α-D-吡喃葡萄糖苷