Wnt/beta-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)到抑制劑（WIKI4）

Wnt/beta-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)到抑制劑（WIKI4）公司*的產(chǎn)品：TM/FITC 熒光標(biāo)記血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG
TM/Biotin 生物化血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgG
TNF- Alpha /Gold 膠體金離子標(biāo)記腫瘤壞死因子抗體
A/H1N1-M2 Human /Biotin 生物標(biāo)記兔抗人A型人流感病H1N1-M2抗體IgG
OVA/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗雞卵白蛋白

商品介紹：

產(chǎn)品屬性：

中文名稱(chēng)：Wnt/beta-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)到抑制劑（WIKI4）

英文名稱(chēng)：WIKI4

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

釀酒酵母Halorubrum trapanicum大鼠維生C(VC)

盤(pán)孢屬Natrialba asiatica大鼠維生B6(VB6)

斑褶菇*Bifidobacterium longum subsp. infantis大鼠維生B6(VB6)

奧氏蜜環(huán)菌Bifidobacterium pseudolongum subsp. globosum大鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)

暗褐色毛霉Halorubrum sodomense大鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)

巨大芽孢桿菌 AAeromonas veronii大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)

泰國(guó)考克娃酵母Bifidobacterium bifidum大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)

地衣芽孢桿菌Propionibacterium acidipropionici大鼠可溶性P選擇(sP-selectin)

枯草芽孢桿菌Bifidobacterium breve大鼠可溶性P選擇(sP-selectin)

三葉草根瘤菌Bifidobacterium animalis subsp. lactis大鼠S100蛋白(S-100)

干酪棒桿菌Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii大鼠S100蛋白(S-100)

鞘盒菌屬Propionibacterium thoenii大鼠S100B蛋白(S-100B)

巴氏金桿菌Propionibacterium jensenii大鼠S100B蛋白(S-100B)

龜裂鏈霉菌龜裂亞種Propionibacterium acidipropionici大鼠白介1(IL-1)

大腸埃希氏菌Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii大鼠白介1(IL-1)

大豆慢生根瘤菌Propionibacterium acidipropionici大鼠白介1β (IL-1β)

Rad51抗體肺形側(cè)耳柔嫩艾耳球蟲(chóng)

R-鈣粘附分子抗體鳳尾菇毒害艾耳球蟲(chóng)廣東株

急性髓細(xì)胞白血病1蛋白抗體糙皮側(cè)耳(平菇)牛葡萄球菌

根蛋白抗體長(zhǎng)根奧德蘑Fusarium moniliforme
Wnt/beta-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)到抑制劑（WIKI4）雅致放射毛霉 梣酮

赤紅球 風(fēng)內(nèi)酯

根瘤 紫草苷

鏈霉 菝葜皂苷元

鴨肝炎病 草質(zhì)

釀酒酵母 百蕊草I

根霉屬的 硫酸金雀花堿

少根根霉 N-甲基野靛堿

福建楊樹(shù)菇 環(huán)氧澤瀉烯

pCDNA3.1-HA-PTEN 白蠟樹(shù)

球孢白僵 

類(lèi)干酪乳桿 芍藥內(nèi)酯苷

停乳鏈球 水仙苷

綠色木霉 香葉木-7-O-葡萄糖苷

大腸埃希氏 蘆薈多糖