多靶點(diǎn)激酶抑制劑(KW-2449)

多靶點(diǎn)激酶抑制劑(KW-2449)公司正在出售的產(chǎn)品：IKI3 family protein/FITC 熒光標(biāo)記擬南芥IKI3抗體IgG四氧化三鈷 99.9% metals basis
IKK gamma/FITC 熒光標(biāo)記核因子κB激gamma抑制劑抗體IgGN,N-二環(huán)己 98%
IKK alpha/FITC 熒光標(biāo)記核因子κB激alpha抑制劑抗體IgGN,N-二芐 CP,98.0%

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

 

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

厚環(huán)粘蓋牛肝菌大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類Anti-RNF14 Antibody人活化蛋白C抵抗(APCR)

燕麥鐮孢大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類Anti-RNF144A Antibody人活化蛋白C抵抗(APCR)

裂孔平伏菌小鼠抗中性粒核周抗體Anti-RNF138 Antibody人N端外顯肽(Ext-N)

釀酒酵母人抗鈣蛋白抑抗體Anti-RNF144A Antibody人N端外顯肽(Ext-N)

大豆慢生根瘤菌兔骨成型蛋白7Anti-RNF149 Antibody人分泌成分(SC)

蠟狀芽孢桿菌小鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgMAnti-RNF144B Antibody人分泌成分(SC)

小孢根霉寡孢變種人卵清蛋白特異性IgEAnti-RNF2 Antibody人二磷腺苷(ADP)

猴頭菇人抗核仁纖維蛋白抗體Anti-RNF34 Antibody人二磷腺苷(ADP)

薄層菌屬小鼠15脂加氧Anti-RNF2 Antibody人蛋白聚糖(PG)

郎伍德鏈霉菌大鼠透明質(zhì)Anti-RNF25 Antibody人蛋白聚糖(PG)

黃曲霉人系統(tǒng)性紅斑狼瘡Anti-ROBO1 Antibody人吡啶(PYD)

公州類諾氏菌大鼠胰高血糖樣肽1Anti-RNF7 Antibody人吡啶(PYD)

黑倚囊霉小鼠β干擾Anti-ROBO1 Antibody人5羥基乙(5-HIAA)

硫磺菌大鼠膽囊收縮/腸促胰肽Anti-RPA2 Antibody人5羥基乙(5-HIAA)

蠟樣芽孢桿菌人抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體Anti-RORC Antibody人12羥二十烷四烯(12-HETE)

林生毛霉小鼠肌鈣蛋白ⅠAnti-RPA3 Antibody人12羥二十烷四烯(12-HETE)

四分子交聯(lián)體10抗體四旋蛋白藻瑚菌人卵巢癌多藥耐藥細(xì)胞

四分子交聯(lián)體9/四旋蛋白抗體綿皮臥孔菌（平板）曲妥珠單抗（赫塞）耐藥的人乳腺癌細(xì)胞

四分子交聯(lián)體12抗體四旋蛋白禾谷鐮刀菌人肺癌細(xì)胞/5Fu耐藥株

四分子交聯(lián)體13抗體四旋蛋白串珠鐮刀菌人卵巢癌細(xì)胞CoC1順鉑耐藥亞株
多靶點(diǎn)激酶抑制劑(KW-2449)栗酒裂殖酵母 γ-谷氨酰-3-羥基-4-單鹽

葡萄生梅奇酵母 γ-L-谷氨酰對(duì)一水合物

簡(jiǎn)單芽孢桿 γ-L-谷氨酰-β-萘酰

許旺酵母 γ-L-谷氨酰-α-萘酰

柳松菇 γ-氨基丁酸

Burkholderia metallica Vanlaere et al.  N-羥基琥珀酰亞

釀酒酵母 1-羥基苯并三氮唑一水物

枯草芽孢桿 叔丁基苯乙肟碳酸酯

綠僵 N-叔丁氧羰酰-L-白酰甘氨酰-L-精對(duì)酰鹽酸鹽

黃曲霉 Na-對(duì)甲苯磺酰-L-苯甲基酮

婁德羅屬 Na-對(duì)甲苯磺酰-L-賴甲基酮鹽酸鹽

彩色豆馬勃13-2 Na-對(duì)甲苯磺酰-L-精甲酯鹽酸鹽

蘇云金芽孢桿 N-苯甲酰-L-酪氨酰乙酯

地衣芽孢桿 Na-苯甲酰-DL-精-對(duì)硝基酰鹽酸鹽

葡萄球?qū)?/span> Na-苯甲酰-L-精氨酰鹽酸鹽