多重激酶抑制劑(R1530)

公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：多重激酶抑制劑(R1530)
英文名稱：R1530
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)

公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：多重激酶抑制劑(R1530)

英文名稱：R1530

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天

商品介紹：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

岸喜鹽芽孢桿菌Azotobacter vinelandii

葡萄生木層孔菌Acetobacter pasteurianus

腸膜明串珠菌Lactobacillus plantarum

鮑氏不動(dòng)桿菌Lactobacillus plantarum

大腸埃希氏菌Mycobacterium fortuitum

雜色曲霉原變種Mycobacterium fortuitum

盤長(zhǎng)孢狀盤孢Paenibacillus polymyxa

小平菇（秀珍菇）Paenibacillus polymyxa

科恩根霉Paenibacillus polymyxa

柱孢Micrococcus luteus

Ensifer fredii

巨型艾耳球蟲Bradyrhizobium japonicum

普通變形菌Lactobacillus casei

肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種Paenibacillus polymyxa

紅細(xì)菌屬Paenibacillus polymyxa

毛霉屬Corynebacterium crenatum

豬可溶性間粘附分子1(sICAM-1)免疫試劑盒磷化A-Raf抗體人堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)朝藿定B

豬可溶性P選擇(sP-Selectin)免疫試劑盒紅腺苷脫3抗體人堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)朝藿定C

豬抗中性粒彈性蛋白抗體(ANEA)免疫試劑盒雄激結(jié)合蛋白抗體人巨噬炎性蛋白5(MIP-5)車葉草苷

豬巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)免疫試劑盒肝再生增強(qiáng)因子抗體人巨噬炎性蛋白5(MIP-5)橙花
多重激酶抑制劑(R1530)SMOC2 英文名稱： 分泌模塊化鈣結(jié)合蛋白2抗體(平滑肌相關(guān)蛋白2) 0.2ml

EPCR 英文名稱： 內(nèi)皮細(xì)胞活化蛋白受體抗體 0.2ml

細(xì)胞表面趨化因子受體2/5抗體 Anti-CCR-2/5 0.1ml

Anti-VAT/FITC 熒光素標(biāo)記囊泡乙酰膽堿通道抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-HER3 (Tyr1289) 磷酸化HER3受體抗體 規(guī)格 0.1ml

CD24 CD24抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg