mTOR抑制劑（WYE-354）

商品介紹：

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：mTOR抑制劑（WYE-354）

英文名稱：WYE-354

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細胞生物學研究有以下幾個方面：

細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：

①細胞核、染色體以及基因表達的研究；

②生物膜與細胞器的研究；

③細胞骨架體系的研究；

④細胞增殖及其調控；

⑤細胞分化及其調控；

⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細胞的起源與進化；

⑧細胞工程.

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

桃花山類芽孢桿菌Ralstonia eutropha兔子葡萄糖依賴性胰島釋放多肽(GIP)

釀酒酵母Lactobacillus casei兔子間粘附分子2(ICAM-2/CD102)

解脂亞羅酵母Burkholderia vesicularis兔子間粘附分子2(ICAM-2/CD102)

蟲草菌Burkholderia gladioli兔子間粘附分子1(ICAM-1/CD54)

雞傷寒沙門氏菌Burkholderia cepacia兔子間粘附分子1(ICAM-1/CD54)

葡萄狀穗霉屬Bifidobacterium animalis subsp. lactis兔子透明質(HA)

蘋果鏈格孢Burkholderia cepacia兔子透明質(HA)

珊瑚色諾氏菌Burkholderia gladioli兔子瘦(LEP)

金黑小單孢菌Pseudoalteromonas sp.兔子瘦(LEP)

宋氏志賀氏菌Bifidobacterium thermacidophilum subsp. thermacidophilum兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)

蘆葦黃桿菌Bifidobacterium thermacidophilum subsp. thermacidophilum兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)

草木樨中華根瘤菌Lactobacillus helveticus兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)

月季黑斑病*Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)

惡臭假單胞菌Lactobacillus casei兔子神經(jīng)特異性烯化(NSE)

產(chǎn)短桿菌Halobacillus litoralis兔子神經(jīng)特異性烯化(NSE)

Rhizobium cellulosilyticum  Acinetobacter calcoaceticus兔子神經(jīng)生長因子(NGF)

血管內皮細胞生長因子受體3抗體尻鏈霉菌鼠傷寒沙門氏菌賓斯變種

神經(jīng)生長因子誘導蛋白抗體南極類芽孢桿菌海德爾堡沙門氏菌

血管粘附蛋白1抗體氣味黃桿菌阿邦尼沙門氏菌

血管內皮生長因子受體1抗體鞘單胞菌豬傷寒沙門氏菌武達森變種
mTOR抑制劑（WYE-354）Abyssacoccus 

側耳 對基-α-D-吡喃半乳糖苷

枯草芽孢桿 對基-β-D-吡喃葡萄糖苷

蕈青霉 芹菜

韋伯靈芝 對基-α-D-吡喃葡萄糖苷

嗜根考克氏 5-溴-6-3--β-D-半乳糖苷

黃麻枝孢 纖維透析袋（100-500）

葡萄座腔 5-溴-4-3-N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷