以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
VEGFR/PDGFR/FGFR抑制劑 | Pazopanib Hydrochloride | 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Pazopanib Hydrochloride(GW-786034)鹽酸鹽是多靶點(diǎn)抑制劑,對VEGFR1,VEGFR2,VEGFR3,PDGFR,F(xiàn)GFR,c-Kit和c-Fms的IC50分別為10nM,30nM,47nM,84nM,74nM,140nM和146nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:635702-64-6 別名:GW786034 純度:99.92% 分子量:473.98 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
聚生殼菌環(huán)指蛋白23抗體Anti-DNAJB1 Antibody原肌球蛋白1α(TPM1)
黑曲霉環(huán)指蛋白24抗體Anti-DNM2 Antibody原鈣黏γA2(PCDHγA2)
有柄樹舌環(huán)指蛋白25抗體Anti-DNMT1 Antibody原鈣黏β9(PCDHβ9)
豌豆根瘤菌環(huán)指蛋白31抗體Anti-DOK7 Antibody原鈣黏β8(PCDHβ8)
褐黃木耳(琥珀木耳)環(huán)指蛋白34抗體Anti-DNTT Antibody原鈣黏β7(PCDHβ7)
芥黃蜜環(huán)菌環(huán)指蛋白21抗體Anti-DPP4 Antibody原鈣黏β6(PCDHβ6)
BL21(DE3)star環(huán)指蛋白190抗體Anti-DPT Antibody原鈣黏β5(PCDHβ5)
平滑假絲酵母酯抑制劑8抗體Anti-DR1 Antibody原鈣黏β4(PCDHβ4)
中慢生華癸根瘤菌神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白1抗體Anti-DPYD Antibody原鈣黏β3(PCDHβ3)
釀酒酵母神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白2抗體Anti-DPYD Antibody原鈣黏β2(PCDHβ2)
鼠李糖乳桿菌環(huán)指蛋白130抗體Anti-DR3/Tnfrsf25 Antibody原鈣黏β16(PCDHβ16)
枯草芽胞桿菌RNA結(jié)合蛋白26抗體Anti-DR6/TNFRSF21 Antibody原鈣黏β15(PCDHβ15)
釀酒酵母環(huán)指蛋白32抗體Anti-DR5/TNFRSF10B Antibody原鈣黏β14(PCDHβ14)
大豆根瘤菌環(huán)指蛋白189抗體Anti-DRAGON/RGMB Antibody原鈣黏β13(PCDHβ13)
草莖點(diǎn)霉E3泛蛋白連接144B/環(huán)指蛋白144B抗體Anti-DRD2 Antibody原鈣黏β12(PCDHβ12)
球孢白僵菌RNA結(jié)合蛋白20抗體Anti-DRD3 Antibody原鈣黏β11(PCDHβ11)
紫蓋蜜環(huán)菌Armillaria│violacea H.C. Wang,G.F. Qin & J. Zhao 質(zhì)量規(guī)格:0.98
球孢白僵菌Beauveria│bassiana 質(zhì)量規(guī)格:>98%
瑞氏梅奇酵母Metschnikowia│reukaufii 質(zhì)量規(guī)格:>98%
VEGFR/PDGFR/FGFR抑制劑嗜果刀孢 4-吡啶促肝生長Elisa
腸膜明串珠 3-溴苯甲胰淀粉Elisa
Cellulomonas carbonis 3-溴苯甲胰脂肪Elisa
黃暗青霉 3-氟鄰苯二甲酸胸膜肺炎放線ApxⅣA抗體Elisa
釀酒酵母 2,4-二氟弓形體抗體Elisa
紡錘形毛殼 2,3-二羥基喹喔啉傳染性胃腸炎病Elisa
平田頭菇10-3 1H-苯并咪唑-5-羧酸乙型腦炎病Elisa
大腸埃希氏 2-甲基-4-戊烯酸傳染性胸膜肺炎Elisa
圍小叢殼 臘樣芽孢桿選擇瓊脂基礎(chǔ)副豬嗜血桿抗體Elisa
斯氏普羅威登斯 5-戊酰流感抗體Elisa
華根霉 葡萄糖酪胨瓊脂支原體肺炎抗體Elisa
耐熱拉錢斯氏酵母 動力-硝酸鹽培養(yǎng)基細(xì)小病抗體Elisa
香菇 含鐵牛奶培養(yǎng)基口蹄疫O型抗體Elisa
枯草芽孢桿枯草亞種 2-基酸乙酯口蹄疫感染抗體Elisa
微球 1%NaCl蔗糖口蹄疫病VP1結(jié)構(gòu)蛋白抗體Elisa