化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
100μl | 1～3天 |
商品介紹：
本品是溶于DMSO的CCCP溶液，濃度為50mM，體積為100μl（相當于1mg的總量），常用作一種陽性對照來誘導細胞凋亡，并配合線粒體膜電位檢測探針JC-1（貨號SY0488）或者JC-10（貨號SY0490）來進行相關(guān)研究。 CCCP，即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone，一種質(zhì)子載體（H+ ionophore），是一種強效的線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，促使線粒體內(nèi)膜對H+產(chǎn)生通透性，導致線粒體內(nèi)膜兩側(cè)的膜電位喪失，誘導凋亡發(fā)生。也可作用于葉綠體膜，抑制光合作用；CCCP還可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體（ER-Golgi）之間的蛋白轉(zhuǎn)運，高親和力結(jié)合細胞色素氧化酶。 CCCP還具有其他功能： 1）在牛蛙交感神經(jīng)方面的實驗表明，CCCP 可增強促黃體生成素釋放激素的釋放； 2）作為一種質(zhì)子導體在葡萄糖存在的情況下影響E.coli 細胞活性； 3）對細胞內(nèi)鈣水平的各種調(diào)節(jié)效應(yīng)； 4）抑制脂肝酶的分泌； 5）部分抑制pH梯度活化的Cl-攝取以及刷狀緣膜的Cl-/Cl-交換等。 儲存條件：-20℃，有效期12個月 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
尿激型纖溶原激活因子受體(uPAR)英文名稱：uPAR ELISA Kit脫羧蛋白體36抗體包裝500mg
尿激型纖溶原激活因子(uPA)英文名稱：uPA ELISA Kit間隙連接蛋白40抗體包裝25g
鳥苷環(huán)化激活因子2A(GUCA2A)英文名稱：GUCA2A ELISA Kit間隙連接蛋白43抗體包裝5g
鳥脫羧(ODC)英文名稱：ODC ELISA Kit間隙連接蛋白45抗體包裝100g
黏膜地址細胞黏附分子(MAdCAM1)英文名稱：MAdCAM1 ELISA Kit表面趨化因子受體1抗體包裝25g
尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷氧化4(NOX4)英文名稱：NOX4 ELISA Kit色P450單氧化抗體包裝500g
尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷氧化1(NOX1)英文名稱：NOX1 ELISA Kit色C抗體包裝1g
尼克酰胺-N-基轉(zhuǎn)移(NNMT)英文名稱：NNMT ELISA Kit角蛋白1抗體包裝1g
內(nèi)脂(VF)英文名稱：VF ELISA Kit巨病PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白抗體包裝1g
內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白抑制因子(Vaspin)英文名稱：Vaspin ELISA Kit周期C抗體包裝5g
內(nèi)皮脂肪(LIPG)英文名稱：LIPG ELISA Kit周期B1抗體包裝1g
內(nèi)皮抑(ES)英文名稱：ES ELISA Kit球蛋白抗體包裝1g
內(nèi)皮型一氧化氮合(NOS3)英文名稱：NOS3 ELISA Kit周期D1抗體包裝1g
內(nèi)皮細胞TEK酪激(Tie2)英文名稱：Tie2 ELISA Kit周期D2抗體包裝5g
內(nèi)皮轉(zhuǎn)化1(ECE1)英文名稱：ECE1 ELISA Kit周期E抗體包裝25g
: A272資源名稱: 假諾卡氏菌 質(zhì)量規(guī)格：≥85%,BR腫瘤壞死因子β試劑盒紫云英苷;astragalin
短小盒菌Parvularcula│sp. 質(zhì)量規(guī)格：純度大于98%腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化試劑盒知母皂苷A-Ⅲ;Timosaponin
芽孢桿菌屬Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：純度> 99%腫瘤壞死因子α試劑盒樟腦;Camphor
CCCP(50mM) 細胞凋亡誘導劑大腸埃希氏 3′-氯苯乙酮乙脫氫Elisa
猴頭—50043 3-(1-萘基)烯酸乙脫氫Elisa
米羅布里格小單孢 4,5-二氟-2-乙脫氫2Elisa
米曲霉 二甲酚乙脫氫家族1-A3Elisa
蘇云金芽孢桿 2-甲?；夤鹚嵋阴oA羧化Elisa
大腸埃希 1-Boc-3-酮乙酰CoA羧化1Elisa
西西布哈加瓦氏 5-氯-2,4-二氟乙酰膽堿Elisa
谷氨酸棒狀桿ATCC13032 N-1-Boc-2-哌甲酸甲酯乙酰膽堿受體抗體Elisa
米根霉 4-乙烯基-4'-戊基二環(huán)己烷乙酰膽堿酯Elisa
慢生根瘤 1-N-Boc-4-氧代-3-羧酸乙酯乙酰膽堿酯抗體Elisa
變異短波單胞 奈韋拉平乙酰羧化Elisa
多粘芽孢桿 5,6-二氟苯并[c][1,2,5]噻二唑乙酰乙?；D(zhuǎn)移2Elisa
美澳型核果褐腐病 6-溴-4-羥基喹啉-3-甲酸乙酰肝Elisa
黑曲霉 華法林鈉(含異)乙型肝炎E抗原Elisa
平菇 1,4-二氨基蒽醌乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白Elisa
化工儀器網(wǎng)