以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Mps1-IN-1是Mps1高效選擇性抑制劑,IC50值為367nM,對其他352種激酶抑制力基本無,特別是Alk和Ltk。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1125593-20-5 純度:99.61% 分子量:535.66 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
赤褐鵝膏菌胰島受體-α(抗原)Anti-BARD1 Antibodyα2-微球蛋白樣蛋白1(α2ML1)
食用油 B 1 胰島受體-β(抗原)Anti-BAZ2A Antibodyα2-巨球蛋白(α2M)
樟疫霉胰島受體底物-1(抗原)Anti-BCAS3 Antibodyα2-HS糖蛋白(αHSG)
桔梅奇酵母水通道蛋白-3抗原Anti-BCAP31 Antibodyα1-微球蛋白(α1M)
蘇云金芽胞桿菌蠟螟亞種胰島受體底物-2(抗原)Anti-BCL2L11 Antibodyα1-性糖蛋白(α1AGP)
產(chǎn)氣莢膜梭菌 C型水通道蛋白-1抗原Anti-BCAS4 Antibodyα1-抗胰糜蛋白(α1ACT)
熒光假單胞菌胰島受體底物-3(抗原)Anti-BATF3 Antibodyα1-抗(α1AT)
嗜松青霉胰島受體底物-4(抗原)Anti-BCKDK Antibodyα1-B-糖蛋白(α1BG)
短小芽孢桿菌Anti-BCL2L12 AntibodyZinedin蛋白(ZIN)
鍺栓孔菌前列腺E2抗原Anti-BCL6 AntibodyZeste同源物增強(qiáng)子2(EZH2)
粗糙脈孢菌整合-β3(抗原)Anti-BCLAF1 AntibodyZeste同源物增強(qiáng)子1(EZH1)
毛球馬勃屬水通道蛋白-9抗原 (多肽抗原)Anti-BCR AntibodyZeste12同源物1抑制因子2(SUZ12)
蠟狀芽孢桿菌瘦(多肽抗原)Anti-BDKRB1 AntibodyY-染色體胸腺β4(Tβ4Y)
宇佐曲霉B1變種瘦受體(長)(抗原)Anti-BEND4 AntibodyYY肽3(PYY3)
梭形凸臍蠕孢雄激受體(多肽)Anti-BFAR AntibodyYY肽2(PYY2)
炭黑曲霉絲裂原活化蛋白激(抗原)Anti-BEST2 AntibodyYY肽(PYY)
Ⅱ型膠原α1N端前體肽抗體Cystobactergracilis人肺癌細(xì)胞(大細(xì)胞肺癌)
蛋白香葉烯基轉(zhuǎn)移1α抗體Roseovariuslitoreus小鼠微血管內(nèi)皮細(xì)胞
蛋白香葉烯基轉(zhuǎn)移1βFTβ抗體Roseovariushalocynthiae小鼠胚胎瘤細(xì)胞
橋粒斑菲蛋白2抗體Roseivivaxsediminis雞淋巴瘤細(xì)胞
Mps1抑制劑(Mps1-IN-1)紫色紅曲 乳酸鏈球
Micromonospora 3-叔丁基
中華泰勒蟲(定西株) 纈沙坦
干酪乳桿 酸二鈉
嗜冷假單胞 大孔吸附樹脂AB-8
發(fā)酵性酵母 泊
蘋果黑腐皮殼 環(huán)基溴
Pseudomonas seleniipraecipitans 燦爛黃
黃傘 百里醌
大腸埃希 百里醌
枯草芽孢桿 硫酸奎尼丁
長柄大環(huán)柄菇 4-甲基七葉亭
柯里殼囊孢 硫酸鑭(III) 水合物
灰葡萄孢 4-甲基七葉亭
韓國假單胞 硫酸鑭(III) 水合物