去泛素化酶抑制劑（DUBs-IN-1）

去泛素化酶抑制劑（DUBs-IN-1）公司*的產(chǎn)品：TNF- Alpha /HRP 辣根過氧化物標(biāo)記腫瘤壞死因子抗體IgG
TNF- Alpha /HRP 辣根過氧化物標(biāo)記鼠抗人腫瘤壞死因子-α單克隆抗體IgG
CD34/Biotin 生物標(biāo)記CD34抗體IgG
TOPO II Alpha/DNA TP II Alpha /FITC 熒光標(biāo)記DNA拓普西異構(gòu)Ⅱ抗體IgG
TNF- A

商品介紹：

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：去泛素化酶抑制劑（DUBs-IN-1）

英文名稱：DUBs-IN-1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

硫色鐮刀菌Bifidobacterium indicum大鼠白三烯B4(LTB4)

蛋白原乳桿菌Bifidobacterium choerinum大鼠白血病抑制因子受體(LIFR)

哈茨木霉Bifidobacterium pseudocatenulatum大鼠白血病抑制因子受體(LIFR)

棲藻海卵菌Bifidobacterium saeculare大鼠表皮生長因子(EGF)

楊盤二孢菌*Bifidobacterium coryneforme大鼠表皮生長因子(EGF)

蟹味菇（白）Lactococcus lactis subsp. lactis大鼠腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)

枯草芽孢桿菌Bifidobacterium thermacidophilum subsp. porcinum大鼠腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)

大腸桿菌Bifidobacterium gallinarum大鼠端粒(TE)

茶樹菇Enterococcus durans大鼠端粒(TE)

菌生假絲酵母Lactobacillus sp.大鼠基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)

日本根霉Clostridium thermocellum大鼠基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)

雪白紅鏈霉菌Clostridium thermocellum大鼠基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)

尖孢鐮孢Clostridium thermocellum大鼠基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)

氣球菌屬Clostridium sp.大鼠基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)

釀酒酵母Clostridium sp.大鼠基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)

豬丹絲菌Clostridium sp.大鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1(TIMP-1)

Rho家族GTP3抗體羊肚菌Ulocladium botrytis

周期D相關(guān)蛋白抗體寬鱗大孔菌變鉛青鏈霉菌

維甲相關(guān)孤兒受體γ抗體雞腿菇（毛頭鬼傘）大腸埃希氏菌DH5a/pEGFP-CEM15

GTP結(jié)合蛋白RAC1+RAC2抗體高羊肚菌大腸埃希氏菌DH5α/T/gfp
去泛素化酶抑制劑（DUBs-IN-1）焦曲霉 β-葡聚糖

蜂房哈夫尼 遼東楤木皂苷V

乳酸乳球乳亞種 芹菜-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷

Bacillus L-半乳糖酸-1,4-內(nèi)酯

更新世肉桿 川續(xù)斷皂苷VI

深綠木霉 異甘草

紫丁香蘑 長春質(zhì)堿

黑曲霉 文多靈

鏈霉屬 (R型)原人參二

辣乳菇 高香草酸

釀酒酵母 異內(nèi)酯

健康皮張抗原（山羊皮） 黃芪多糖

麥角 延齡草苷

紅紫青霉 當(dāng)歸多糖

金針菇 白樺脂