mTOR和DNA-PK抑制劑(CC-115 hydrochloride)

mTOR和DNA-PK抑制劑(CC-115 hydrochloride)公司*的產(chǎn)品：Anti-VAMP-1/FITC 熒光素標(biāo)記囊泡相關(guān)膜蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
CD14(cluster of differentiation antigen 14) CD14/內(nèi)毒素受體抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

產(chǎn)品屬性：

中文名稱(chēng)：mTOR和DNA-PK抑制劑(CC-115 hydrochloride)

英文名稱(chēng)：CC-115 hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

發(fā)貨周期：1～3天

商品介紹：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

異色擬盤(pán)多毛孢Paenibacillus polymyxa

泡盛曲霉Lysinibacillus sphaericus

產(chǎn)堿假單胞菌Lysinibacillus sphaericus

玉蜀黍平臍蠕孢Lysinibacillus sphaericus

蠟狀芽孢桿菌Lysinibacillus sphaericus

多源中間根瘤菌Lysinibacillus sphaericus

合歡枯萎病Bacillus thuringiensis

華癸中間根瘤菌Bacillus thuringiensis

無(wú)二檸檬桿菌Bacillus thuringiensis

猴頭Bacillus thuringiensis

類(lèi)芽孢桿菌Bacillus thuringiensis

反芻雙歧桿菌Bacillus coagulans

寄生彎孢聚殼Bacillus thuringiensis

食腺芽生葡萄孢酵母Bacillus larvae

毛球菌屬Bacillus thuringiensis

釀酒酵母Bacillus thuringiensis

磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-α抗體尖盾雞樅菌敏捷固氮菌

磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體α/β抗體粗柄雞樅菌熱帶醋桿菌

磷化蛋白活化受體4抗體假紫褐絲膜菌反硝化短枝單胞菌

磷化磷脂酰肌激抗體皺蓋乳菇類(lèi)白喉?xiàng)U菌
mTOR和DNA-PK抑制劑(CC-115 hydrochloride)phospho-Stathmin 1 (Ser24) 英文名稱(chēng)： 磷酸化原癌基因蛋白18抗體 0.1ml

Eppin 英文名稱(chēng)： 附睪蛋白酶抑制蛋白 0.2ml

腺苷酸環(huán)化酶激活肽-27/38抗體 Anti-PACAP-27/38 0.2ml

Anti-SP-D/FITC 熒光素標(biāo)記肺表面活性蛋白D抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-NFKB1(Ser907) 磷酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 規(guī)格 0.1ml

ERAB 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Aβ相關(guān)結(jié)合蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg