以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Omeprazole(Prilosec)是質(zhì)子泵抑制劑,可作用于消化不良。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):73590-58-6 純度:97.06% 分子式:C??H??N?O?S 分子量:345.42 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
枯斑擬盤多毛孢A型病H7N9 M1蛋白抗體Human SQRDL ELISA Kit大鼠催乳(PRL)免疫試劑盒
食氮嗜異生質(zhì)菌人絨毛膜促性腺激α亞基/hCG α 抗體Human SQLE(Squalene monooxygenase) ELISA Kit大鼠催產(chǎn)(OT)免疫試劑盒
漢遜德巴利酵母乙酰肝抗體Human SPRR2F ELISA Kit大鼠促胰液/胰泌(Sct)免疫試劑盒
阪崎腸桿菌組蛋白H3樣蛋白抗體Human SRA1 ELISA Kit大鼠促性腺激抑制激(GnIH)免疫試劑盒
麥根腐平臍蠕孢HHLA1蛋白抗體Human CA4(Carbonic anhydrase 4) ELISA Kit大鼠促性腺激釋放激受體抗體(GNRHR-Ab)免疫試劑盒
希瓦氏菌屬心肌肌球蛋白重鏈抗體Human SPO11 ELISA Kit大鼠促性腺激釋放激受體(GnRHR)免疫試劑盒
青春雙歧桿菌異質(zhì)性核糖核蛋白M抗體Human SPATA7 ELISA Kit大鼠促性腺激釋放激(GnRH)免疫試劑盒
烏芝附睪分泌蛋白4抗體Human SPATA6 ELISA Kit大鼠促?;鞍?ASP)免疫試劑盒
茄鏈格孢鐵硫簇整合同源物2蛋白抗體Human SPATS2L ELISA Kit大鼠促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子(CRF)免疫試劑盒
哈里法克斯希瓦氏菌HIG1區(qū)域家族成員2A抗體Human SPCS1 ELISA Kit大鼠促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒
剛果嗜皮菌結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗體Human SPHK1 ELISA Kit大鼠促腎上皮質(zhì)激釋放激(CRH)免疫試劑盒
赭色擲孢酵母高遷移率族蛋白B4抗體Human SPDYA ELISA Kit大鼠促卵泡(FSH)免疫試劑盒
黃蜜環(huán)菌硫肝糖蛋白1抗體抗體Human SPHK1-Phospho-Ser225 ELISA Kit大鼠促甲狀腺受體(TSHR)免疫試劑盒
馬葡萄球菌叉頭蛋白J1抗體Human CADM3(Cell adhesion molecule 3) ELISA Kit大鼠促甲狀腺釋放激(TRH)免疫試劑盒
農(nóng)藥速測(cè)卡艾滋病病抗體Human SPDYA ELISA Kit大鼠促甲狀腺(TSH)免疫試劑盒
大腸埃希氏桿菌艾滋病病抗體Human SP6 ELISA Kit大鼠雌(E1)免疫試劑盒
涇陽(yáng)鏈霉菌Streptomyces│jingyangensis 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品石吊蘭
: AS2.745資源名稱: 釀酒酵母 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%(GC)白頭翁皂苷B4
蕓薹鏈格孢Alternaria│brassicae (Berk.) Sacc. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品二氫歐山芹當(dāng)歸酯
質(zhì)子泵抑制劑(Omeprazole)APS APS抗體N,N-二 standard for GC, ≥99.5% (GC)
phospho-APS(Ser598) 化APS抗體N-二苯亞-甘氨叔丁酯 98%
AP2 alpha 轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α3,3'-二氟二苯酮 99%
ALT1 谷氨氨轉(zhuǎn)移1抗體1,10-二氨癸烷 97%
AMACR α-酰消旋抗體二鯨蠟酯 98%
Amphiphysin 神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯 分析標(biāo)準(zhǔn)品
AMPK alpha 1 腺苷單活化蛋白激α1抗體二溴 分析標(biāo)準(zhǔn)品
phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491) 化腺苷單活化蛋白激α1抗體薯蕷皂 >95%