以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Cycloheximide是真核生物中蛋白質(zhì)生物合成的抑制劑,抑制蛋白合成和RNA合成,IC50分別為532.5nM和2880nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:66-81-9 別名:Naramycin A;Actidione 純度:99.17% 分子量:281.35 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
石吊蘭英文名稱: D-Mannose神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43包裝1g
石斛酚(標準品)英文名稱: N-Octanoyl-N-methylglucamine3-磷甘油脫氫(兔來源免疫組化用抗體)包裝5g
石斛堿(標準品)英文名稱: N-Decanoyl-N-methylglucamine 3-磷甘油脫氫單克抗體(內(nèi)參抗體)包裝1g
石見穿(標準品)英文名稱: n-Octyl-β-D-Thioglucopyranoside生長停滯特異性蛋白2家族1抗體包裝5g
石椒草(標準品)英文名稱: D(+)-Raffinose pentahydrateG蛋白偶聯(lián)受體97抗體包裝1g
石榴皮(標準品)英文名稱: D-SorbitolG蛋白結(jié)合蛋白7抗體包裝250mg
石榴皮鞣;安石榴林(標準品)英文名稱: N-Octyl-β-D-glucopyranoside綠色熒光蛋白抗體包裝25g
石榴子(標準品)英文名稱: L-(+)-Ribose綠色熒光蛋白抗體包裝5g
石杉堿(標準品)英文名稱: L-(+)-RiboseG蛋白通路抑制蛋白1抗體包裝1g
矢車菊-3-O-葡萄糖苷(標準品)英文名稱: 2-Deoxy-L-ribose膠質(zhì)系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α2抗體包裝5g
使君子(使君子仁)(標準品)英文名稱: 4-Methylumbelliferyl-β-D-xylopyranoside Printable Reviews核突觸蛋白-γ抗體包裝1g
首烏藤(標準品)英文名稱: 2-Deoxy-D-Ribose粒-巨噬克激因子抗體包裝5g
熟地黃(標準品)英文名稱: D-Galactose谷胱甘肽還原抗體包裝5ml
鼠尾草酚(標準品)英文名稱: D-Galactose胰高血糖樣肽-1抗體包裝1g
鼠尾草(標準品)英文名稱: Hydrazine dihydrochloride顆粒蛋白前體抗體包裝25g
繩索狀芽孢桿菌Bacillus│funiculus 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR內(nèi)皮2試劑盒絡(luò)石苷;Tracheloside
魯氏不動桿菌Acinetobacter│lwoffii 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標準品內(nèi)皮1受體試劑盒莨菪堿;L-Hyoscyamine
日本慢生根瘤菌Bradyrhizobium│japonicum 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR內(nèi)皮1試劑盒鐮葉芹二;Falcarindiol
蛋白和RNA合成抑制劑(Cycloheximide)胰島原琥珀;丁二(標準品)Human
上腺髓質(zhì)受體(抗原)琥珀多西拉敏(標準品)Human, Mouse
纖溶原激活物抑制因子琥珀潑尼龍(標準品)Human, Mouse
角蛋白7琥珀普卡必利Human, Mouse, Rat
異硫熒光(FITC)標記糖尿病相關(guān)肽1-37琥珀舒馬曲普坦(標準品)Human
凋亡蛋白活性因子-1(抗原)琥乙紅霉(標準品)Human, Mouse, Rat
凋亡蛋白活性因子-1(抗原)花生四烯(AA)Human
雄激受體(多肽抗原)華蟾它靈;華蟾(標準品)Human, Mouse, Rat
5-羥色受體2A抗原華法林(標準品)Human, Mouse, Rat