商品介紹:
ASP3026是高活性ALK抑制劑,IC50為3.5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1097917-15-1 純度:99.76% 分子量:580.74 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
ALK抑制劑(ASP3026) | ASP3026 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
布魯氏菌 生物Ⅱ型小鼠游離狀腺原Anti-RPS6KB2 Antibody人特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)
釀酒酵母大鼠促腎上皮質(zhì)激釋放激Anti-RPS6KC1 Antibody人特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)
韓國(guó)靈芝小鼠白三烯C4Anti-RPS9 Antibody人胎盤(pán)泌乳(PL)
地衣芽孢桿菌人抗紅抗體Anti-RPS8 Antibody人胎盤(pán)泌乳(PL)
芽胞桿菌大鼠促性腺激釋放激Anti-RPS9 pAb人雄激結(jié)合蛋白(ABP)
米根霉大鼠白三烯B4Anti-RRAGA Antibody人雄激結(jié)合蛋白(ABP)
Paenibacillus人28S抗核糖體抗體Anti-RRAGC Antibody人抗滋養(yǎng)膜抗體(ATA)
熏衣草灰鏈霉菌小鼠色CAnti-RRAD Antibody人抗滋養(yǎng)膜抗體(ATA)
阿根廷鹽盒菌大鼠白血病抑制因子受體Anti-RREB1 Antibody人抗透明帶抗體(aZP)
橙蓋鵝膏菌小鼠游離甲狀腺Anti-RRH Antibody人抗透明帶抗體(aZP)
變化馬賽菌人抗核仁抗體Anti-RRM2B Antibody人抗卵巢抗體(AOAb)
皺褶青霉大鼠表皮生長(zhǎng)因子Anti-RRH Antibody人抗卵巢抗體(AOAb)
產(chǎn)單核李氏桿菌小鼠血管緊張ⅠAnti-RRP8 Antibody人抗巨病抗體IgG(anti-CMV IgG)
纖維微菌屬人抗核膜糖蛋白210抗體Anti-RRP7A Antibody人抗巨病抗體IgG(anti-CMV IgG)
反硝化短枝單胞菌(可訂購(gòu))人抗肝胞質(zhì)1型抗體Anti-RRP8 Antibody人堿性胎兒蛋白(BFP)
異常漢遜酵母大鼠腸脂肪結(jié)合蛋白Anti-RRS1 Antibody人堿性胎兒蛋白(BFP)
腫瘤壞死因子受體超家族成員13B抗體尖孢鐮刀菌番茄?;碗s交瘤細(xì)胞及其它
跨膜絲蛋白5抗體果生鏈核盤(pán)菌抗人磷脂酰肌蛋白聚糖前體蛋白單抗7
胸腺抗體枯草芽孢桿菌 B抗人TATAbox結(jié)合蛋白反應(yīng)蛋白單抗7
轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2抗體蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病抗人pirin單抗7
ALK抑制劑(ASP3026)大腸埃希 三葉豆苷
尖孢鐮孢 L-茶
皮爾瑞俄類芽孢桿 三七皂苷FC
平 菇 5178 人參皂苷 Rg5
嗜熱脂肪地球芽胞桿 人參皂苷 Rg4
肉桂色曲霉 羥基酪醋酸酯
釀酒酵母 檸檬酸酯E
假單胞 DL-正亮
金黃色葡萄球 檸檬酸酯C
球孢白僵 L-正亮
瑞士乳桿 檸檬酸酯B
黃曲霉黃色變種 牡荊精酸鹽
淡紫擬青霉 羅漢果皂苷Ive
巨獸芽孢桿 D-正亮
粉紅單端孢 蘆薈大黃-8-O-葡萄糖苷