商品介紹:
Aprotinin是分離自牛肺的絲氨酸蛋白酶抑制劑,對(duì)胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的Ki值分別為0.06pM和9nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):9087-70-1 純度:99.56% 分子量:6511.44 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
opiorphin(opiorphin)ELISA Kit英文名稱:opiorphin ELISA KitBTBD6蛋白抗體包裝5g
N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯(AcSDKP)ELISA Kit英文名稱:AcSDKP ELISA KitBMP內(nèi)皮調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝25g
N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷(NAG)ELISA Kit英文名稱:NAG ELISA Kit肝病NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8抗體包裝5g
N端前腦鈉(NT-proBNP)ELISA Kit英文名稱:NT-proBNP ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切抗體包裝1g
NANOG同源域蛋白(NANOG)ELISA Kit英文名稱:NANOG ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體包裝5g
NAD依賴性蛋白脫乙酰sirtuin-1(SIRT1)ELISA Kit英文名稱:SIRT1 ELISA Kit微管蛋白β輔助因子D抗體包裝25g
NADPH氧化1(NOX1)ELISA Kit英文名稱:NOX1 ELISA Kit鈣粘蛋白相關(guān)蛋白受體BTR1抗體包裝5g
M型肌激(CKM)ELISA Kit英文名稱:CKM ELISA Kit有絲分裂蛋白BUB3抗體包裝1g
MAP激活化蛋白激2(MAPKAPK2)ELISA Kit英文名稱:MAPKAPK2 ELISA Kitp60TRP蛋白抗體包裝5g
L選擇(L-Selectin/CD62L)ELISA Kit英文名稱:L-Selectin/CD62L ELISA Kit博萊霉解抗體包裝1g
L-乳脫氫A鏈(LDH-A)ELISA Kit英文名稱:LDH-A ELISA Kit短蛋白聚糖抗體包裝5g
L解(PAL)ELISA Kit英文名稱:PAL ELISA KitBTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝10MG
Klotho(Klotho)ELISA Kit英文名稱:Klotho ELISA Kit巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白12抗體包裝100g
KI-67抗原(MKI67)ELISA Kit英文名稱:MKI67 ELISA Kit堿性亮拉鏈蛋白BZW1抗體包裝25g
I型膠原蛋白(COL-1)ELISA Kit英文名稱:COL-1 ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B抗體包裝5g
ASH1蛋白抗體肝核因子1β(HNF1β)CWHM-12是αV整聯(lián)蛋白的有效抑制劑,抑制αvβ8,αvβ3,αvβ6和αvβ1的 IC50 值分別為0.2,0.8,1.5,1.8 nM。
絲氨酸蛋白酶抑制劑(Aprotinin)絲/蘇蛋白質(zhì)激抗體磷烯式羧激1(PCK1)檢測試劑盒PCK1 ELISA Kit
α-連環(huán)蛋白抗體(鈣粘蛋白相關(guān)蛋白)Catenin α磷張力蛋白同源物(PTEN)檢測試劑盒PTEN ELISA Kit
癌易感因2相互作用蛋白抗體磷肌依賴性蛋白激1(PDPK1)檢測試劑盒PDPK1 ELISA Kit
質(zhì)連接蛋白1抗體磷肌-3-激2α肽(PI3K2α)檢測試劑盒PI3K2α ELISA Kit
盤狀結(jié)構(gòu)域受體蛋白2抗體磷二酯12(PDE12)檢測試劑盒PDE12 ELISA Kit
膜糖蛋白CD200抗體淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)檢測試劑盒Lptn ELISA Kit
胰羧肽A1抗體淋巴細(xì)胞抗原75(LY75)檢測試劑盒LY75 ELISA Kit
羧肽A2抗體淋巴細(xì)胞功能關(guān)聯(lián)抗原2(LFA2)檢測試劑盒LFA2 ELISA Kit
腦源性免疫球蛋白超家族蛋白3抗體淋巴毒β(LTβ)檢測試劑盒LTβ ELISA Kit