p110α抑制劑(A66)

p110α抑制劑(A66)公司正在出售的產(chǎn)品：NFKB p52/NF-κB2 p100/FITC 熒光標(biāo)記核因子/k因結(jié)合核因子 p52/p100抗體IgG阿魏 99%
Phospho-NF-κB2 p100 (Ser866/870)/FITC 熒光標(biāo)記核因子/k因結(jié)合核因子p100抗體IgG阿魏 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99.5%（HPLC）
p-NFKBp65(Ser536)/FITC 熒光標(biāo)記化

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

 

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。

洋蔥伯克霍爾德菌人水通道蛋白2Paenibacillus mucilaginosus小鼠胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)

紫皮麗菇人水通道蛋白1Bacillus mycoides小鼠胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)

豬鏈球菌分型血清參考品 血清型 SS12人水通道蛋白0Bacillus mycoides小鼠胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)

釀酒酵母人類風(fēng)濕因子Bacillus mycoides小鼠白介16(IL-16)

桑樹(shù)枝枯病人抗鏈球菌溶血O/抗OBacillus mycoides小鼠白介16(IL-16)

拜耳接合酵母人腎上腺皮質(zhì)抗體Bacillus mycoides小鼠白介3(IL-3)

鏈格孢人抗腎小球基底膜抗體Bacillus mycoides小鼠白介3(IL-3)

熒光假單胞菌人β2微球蛋白Bacillus mycoides小鼠白介4(IL-4)

枯草芽孢桿菌人膜聯(lián)蛋白ⅤBacillus mycoides小鼠白介4(IL-4)

毛栓菌人抗腎小管基底膜抗體Bacillus niacini小鼠白介-5(IL-5)

橄欖灰鏈霉菌人apelin 13Bacillus oleronius小鼠白介-5(IL-5)

根霉人Apelin 36Bacillus pseudofirmus小鼠層連蛋白/板層(LN)

新月彎孢人肌鈣蛋白TBacillus pseudofirmus小鼠層連蛋白/板層(LN)

巴氏醋桿菌人血管內(nèi)皮抑抗體Bacillus pseudofirmus小鼠巨噬集落激因子(M-CSF)

奇異球菌屬人血管緊張Ⅱ受體Ⅰa型Sporosarcina psychrophila小鼠巨噬集落激因子(M-CSF)

球孢白僵菌人血管生成樣蛋白3Bacillus psychrosaccharolytic小鼠巨噬來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)

鋅指蛋白263抗體梨干枯擬莖點(diǎn)菌大鼠心肌細(xì)胞

鋅指蛋白195抗體丁香絲膜菌人的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞

鋅指蛋白266抗體栓黑管菌小鼠腎足細(xì)胞

鋅指蛋白786抗體稻平臍蠕孢(斜面)人支氣管上皮細(xì)胞
p110α抑制劑(A66)澳型核果褐腐病 3,3,-二氨基聯(lián)苯

微小桿 阿奇霉

谷棒桿 3,3-二氨基聯(lián)苯四鹽酸鹽

黑蔥花霉（只確定屬） 側(cè)金盞花

蒼白桿 3,3-二氨基聯(lián)苯四鹽酸鹽

孟氏假單胞 艾黃

枯草芽孢桿 3,3-二氨基聯(lián)苯四鹽酸鹽

地星 阿魏酸鈉

靴狀 3',6'-二熒光

枯草芽孢桿 2,7-二熒光

島青霉 阿魏酸松柏酯

環(huán)狀芽胞桿 二乙酸螢光

黃瓜枯萎病 遠(yuǎn)志糖苷C

科氏葡萄球 王不留行環(huán)肽B

大腸埃希氏桿 異硫酸熒光