二氫葉酸還原酶抑制劑(Trimetrexate)

二氫葉酸還原酶抑制劑(Trimetrexate)公司*的產(chǎn)品：Anti-IL-15/FITC 熒光素標(biāo)記白介素15抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Anti-PTP-1B/FITC 熒光素標(biāo)記PTP-1B蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh APG7/ATG7 自噬相關(guān)蛋白7

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：二氫葉酸還原酶抑制劑(Trimetrexate)

英文名稱：Trimetrexate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

松蘿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Proteinase K乙酰肝2抗體包裝5g

松蘿；D-地衣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Proteinase K人血清抗體包裝1g

松塔（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Chymostatin血紅氧合 1/熱休克蛋白32抗體包裝5g

松葉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Leupeptin 磷化HER3受體抗體包裝1g

松脂二葡萄糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Pepstatin A microbial磷化組蛋白去乙酰化4/5/7抗體包裝1g

松脂;松脂酚,松脂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： L-(-)-Fucose 異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體包裝100g

松脂二英文名稱： Pectinase組蛋白H1抗體包裝25g

蘇合香（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： beta-Amylase組蛋白去乙?；?抗體包裝5g

蘇木（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： beta-AmylaseHAUS3蛋白抗體包裝25g

漿苦味L（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Deoxyribonuclease熱休克蛋白93抗體包裝5g

棗仁（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Taka-Diastase from Aspergillus oryzae 磷化組蛋白去乙?；?抗體包裝25g

棗仁皂苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Taka-Diastase from Aspergillus oryzae 組蛋白H2B抗體包裝5g

棗仁皂苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase短鏈L-3羥烷基脫氫抗體包裝1g

蒜（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Bromelain from pineapple stem 組蛋白去乙?；?抗體包裝5g

穗花杉雙黃（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Thiamine pyrophosphate組蛋白去乙酰化10抗體包裝1g

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于培養(yǎng)膜聯(lián)蛋白Ⅶ試劑盒化矢車菊;Cyanidin Chlo

成對桿菌Dyadobacter│alkalitolerans 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品膜聯(lián)蛋白Ⅵ試劑盒酪;4-Hydroxyphenethy

蓋孔菌Filoboletus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR膜聯(lián)蛋白Ⅴ試劑盒胡黃連苷III;Picroside II
二氫葉酸還原酶抑制劑(Trimetrexate)胰輔脂抗體L-狀腺(標(biāo)準(zhǔn)品) Adenine

17號染色體開放閱讀框104抗體L-狀腺鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Erythromycin ethylsuccinate

和調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄蛋白抗體L-精(標(biāo)準(zhǔn)品） Ibuprofen

富半胱肝結(jié)合蛋白61抗體L-賴（標(biāo)準(zhǔn)品） Ibuprofen

2號染色體開放閱讀框65抗體L-酪(標(biāo)準(zhǔn)品) Enalapril Maleate

β連環(huán)蛋白樣蛋白1抗體L-亮(標(biāo)準(zhǔn)品) Enalapril Maleate

陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控樣蛋白1抗體L-羥脯(標(biāo)準(zhǔn)品) 5-Fluorouracil

DNA斷裂因子相似蛋白A抗體L-乳(標(biāo)準(zhǔn)品) 5-Fluorouracil

DNA斷裂因子相似蛋白B抗體L-色(標(biāo)準(zhǔn)品) Sumatriptan succinate  

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)