商品介紹:
Wogonin是一種天然黃酮類物質(zhì),能夠抑制CDK8andWnt的活性,具有抗炎、抗腫瘤等功效。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:632-85-9 純度:99.82% 分子量:284.26 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
大腸埃希氏菌兔子堿性成纖維生長因子Anti-LDLRAD3 Antibody人型肝炎IgG(HCV-IgG)
Marella suaedae人結(jié)締組織活化肽ⅢAnti-LGALS2 Antibody人型肝炎IgG(HCV-IgG)
玫瑰小雙孢菌大鼠白介7Anti-LEF1 Antibody人糖蛋白130(gp130)
釀酒酵母人巨噬集落激因子受體Anti-LEFTY1 Antibody人糖蛋白130(gp130)
金黃回旋鏈霉菌兔子前列腺E2Anti-LFNG Antibody人促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子(CRF)
熱紫鏈霉菌不滲透亞種魚促卵泡Anti-LFNG Antibody人促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子(CRF)
核桃殼囊孢菌小鼠β-防御Anti-LGALS7 Antibody人去加壓/1-去基-8-右旋-精加壓(dDAVP)
多形布勒擔子酵母凋亡原位(我公司提供代測服務)Anti-LGALS8 Antibody人去加壓/1-去基-8-右旋-精加壓(dDAVP)
香菇(L988)大鼠絲/蘇蛋白磷Anti-LGALS9 Antibody人蕈堿型乙酰受體亞型M3(M-AChR M3)
地衣芽孢桿菌魚促黃體激Anti-LHCGR Antibody人蕈堿型乙酰受體亞型M3(M-AChR M3)
盤長孢狀盤孢小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽Anti-LIG3 Antibody人睪受體(TR)
蠟蚧菌人免疫球蛋白A Fc段受體ⅠAnti-LILRA1 Antibody人睪受體(TR)
IBV M41 HAR/HI serum 陽性血清(荷蘭引進)兔子5羥色Anti-LIG4 Antibody人蕈堿型乙酰受體(M-AChR)
間型串珠鐮孢兔子β內(nèi)啡肽Anti-LILRA2 Antibody人蕈堿型乙酰受體(M-AChR)
昆明鏈霉菌小鼠神經(jīng)絲蛋白Anti-LILRA4 Antibody人糖蛋白49A(Gp49a)
蘇云金芽孢桿菌蘇云金亞種魚磷化腺苷活化蛋白激Anti-LILRA5 Antibody人糖蛋白49A(Gp49a)
視黃醛結(jié)合蛋白1抗體克魯斯假絲酵母小鼠肺腺癌細胞系
環(huán)指蛋白5抗體E3泛蛋白連接RNF5綠色鏈霉菌人肺癌細胞
核糖體蛋白L15抗體地生翅孢殼昆蟲細胞
核糖體蛋白L19抗體奇異翅孢殼鼠黑色瘤細胞
CDK8andWnt抑制劑(Wogonin)炭疽芽孢桿 哈氏豆屬酸
大腸埃希 九里香內(nèi)酯
假單胞屬 Griselinoside
植物乳桿植物亞種 Goniotriol
枯草芽孢桿 Glycozolinine
那波鏈霉 粗毛甘草 A
生癌腸桿 算盤子二
干小皮傘 海堿B
黑曲霉 靈芝F
雜色曲霉原變種 高良姜萜內(nèi)酯
松口蘑 Futoquinol
長雙歧桿 Flavaprin
假中間葡萄球 Fargesone A
疣孢 Exoticin
粗柄羊肚 穆茱萸內(nèi)酯