以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Navoximod是一種有效的IDO抑制劑,IC50值<1μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1402837-78-8 純度:99.99% 分子量:316.37 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
芬氏纖維微菌小鼠降鈣Anti-SEC16A Antibody人補體片段3c(C3c)
米曲霉小鼠脫氫表雄硫酯Anti-SELENOW Antibody人補體7(C7)
本鄉(xiāng)鵝膏菌大鼠神經(jīng)特異性烯化Anti-SEC22B Antibody人補體7(C7)
植物乳桿菌人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體Anti-SEMA4A Antibody人補體7(C7)
橙色桿狀菌人抗DNAB抗體Anti-SEC23B Antibody人補體7(C7)
林生地霉小鼠內(nèi)皮1Anti-SENP1 Antibody人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)
門多薩假單胞菌大鼠間粘附分子2Anti-SEMA4A Antibody人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)
紅色皺紋單胞菌小鼠雌二Anti-SEMA4C Antibody人chemerin
黃色籃狀菌人抗BP180抗體Anti-SEMA4D Antibody人chemerin
擬粉紅鎖擲孢酵母大鼠間粘附分子3Anti-SENP1 Antibody人Ⅻ(FⅫ)
草菇大鼠纖溶原激活物抑制因子1Anti-SENP2 Antibody人Ⅻ(FⅫ)
梭菌人抗BB抗體Anti-SENP7 Antibody人ⅩⅢ(FⅩⅢ)
雙核絲核菌小鼠皮質(zhì)Anti-SENP7 Antibody人ⅩⅢ(FⅩⅢ)
海南根瘤菌人抗平滑肌抗體Anti-SENP3 Antibody人Ⅲ(FⅢ)
滑菇小鼠促甲狀腺Anti-SENP5 Antibody人Ⅲ(FⅢ)
木賊鐮孢大鼠纖溶原激活物抑制因子Anti-SEPHS1 Antibody人補體1q(C1q)
四分子交聯(lián)體4抗體四旋蛋白茄褐紋擬莖點霉M13#14
四分子交聯(lián)體3抗體四旋蛋白紅紫韌革菌JEV/4D1C
TTC33蛋白抗體側(cè)孢芽孢桿菌M1095#2B10
轉(zhuǎn)錄增強因子TEF3抗體細極鏈格孢菌TBCA6
IDO抑制劑(Navoximod)布魯氏病試管凝集試驗抗原 人參皂苷F4
枯草芽孢桿 L-纈甲酯鹽酸鹽
榛色假單胞 遠志皂苷D
球孢鏈霉 CBZ-D-纈
丹氏艾耳球蟲 去甲堿鹽酸鹽
芽胞桿 FMOC-L-纈
米曲霉 蝙蝠葛諾林堿
禾谷絲核 DL-纈
褐囊蜜環(huán) 辛弗林鹽酸鹽
豬肚菇 D-纈
釀酒酵母 N-甲基金雀花堿氫酸鹽
嗜水氣單胞 L-纈
吉林?jǐn)S孢酵母 五水合硫酸司巴丁
產(chǎn)氨短桿 L-酪二鈉鹽
金灰青霉 3-羥基-9,10-二甲氧基紫檀烷;迪紫檀