商品介紹:
WZ4002是突變選擇性的EGFR抑制劑;對(duì)EGFRL858R,EGFRL858R/T790M,EGFRE746_A750,EGFRE746_A750/T790M的IC50值分別為2,8,3,2。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1213269-23-8 純度:98.67% 分子量:494.97 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:EGFR抑制劑(WZ4002)
英文名稱:WZ4002
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
黃曲霉人熱休克蛋白90Bacillus pumilus小鼠可溶性CD30配體(sCD30L)
孢小克銀漢霉輪生變種人熱休克蛋白70Bacillus schlegelii小鼠干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)
糙孢曲霉人熱休克蛋白40Bacillus shijiazhuanggensis小鼠干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)
假絲酵母屬人熱休克蛋白20Bacillus shijiazhuanggensis小鼠基質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)
淡紫擬青霉人肌球蛋白Bacillus smithii小鼠基質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)
伯頓絲孢畢赤酵母人凝溶膠蛋白Bacillus simplex小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)
彩色豆馬勃人C反應(yīng)蛋白Bacillus sp.小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)
土曲霉人固Bacillus sp.小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)
枯草芽孢桿菌人肌紅蛋白Bacillus sp.小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)
柱形胞鏈霉菌人心肌肌鈣蛋白ⅠBacillus sp.小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)
多形布勒擔(dān)子酵母人血管生成受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激1Bacillus sp.小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)
多噬伯克霍爾德氏菌人血管生成2Bacillus sp.小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)
米根霉人血管生成1Bacillus sp.小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)
產(chǎn)卟啉桿菌人血管生長Bacillus sp.小鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)
戊糖片球菌人血管緊張ⅡBacillus sp.小鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)
冬菇人帕金森氏病2ParkinBacillus sp.小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)
鋅指蛋白516抗體紫皮麗菇人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞
鋅指蛋白750抗體黃皮疣柄牛肝菌人小腦顆粒細(xì)胞
鋅指蛋白704抗體漏斗多孔菌人胃粘膜細(xì)胞
宮頸癌抑癌蛋白5/鋅指蛋白434抗體大豆莖潰瘍菌人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞
EGFR抑制劑(WZ4002)枯草芽孢桿 Ⅱ
釀酒酵母 絞股藍(lán)皂苷A
樟疫霉 Ⅲ
炭疽芽胞桿 碟豆
枯草芽孢桿 Ⅳ
黑青霉 戈米辛N
氨基黑10B
假單胞 固藍(lán)RR鹽
海岸分枝桿 堅(jiān)牢藍(lán)BB鹽
泗川假黃單胞 戈米辛N
豇豆慢生根瘤 固鹽
擬青霉 固黑K鹽
水稻節(jié)桿 1,3,5-三咖啡酰奎寧酸
植物乳桿 23S-羥基-11,15-二氧靈芝酸DM
魯氏接合酵母 固紫醬GBC鹽