PI3K/AktandmTOR抑制劑（PI-103）

PI3K/AktandmTOR抑制劑（PI-103）公司正在出售的產品：Anti-SAMDC/AMD1/FITC 熒光素標記S-腺苷蛋氨酸脫羧酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) ?？窠浂舅?35肽)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1mg

商品介紹：

以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。

2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。

對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養(yǎng)液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。

3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。

4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測

1) 流式細胞儀檢測：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。

建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。

2) 熒光顯微鏡檢測：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

鹽沼鹽古桿菌（鹽沼沙雷氏菌）Arthrobacter nicotianae

肉桿菌Arthrobacter nicotinovorans

枯草芽孢桿菌枯草亞種Arthrobacter protophormiae

韓國假單胞菌Arthrobacter niigatensis

香菇Arthrobacter polychromogenes

卵形巴貝斯蟲（遼陽株）Arthrobacter oxydans

紅淡紫灰鏈霉菌Arthrobacter paraffineus

根瘤菌Arthrobacter psychrolactophilus

釀酒酵母Arthrobacter ramosus

梅林青霉Arthrobacter stackebrandtii

弧菌Arthrobacter uratoxydans

細黃鏈霉菌Azospirillum brasilense

Azotobacter vinelandii

黃孢鏈霉菌Bacillus aidingensis

蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種Arthrobacter sulfureus

粘質沙雷氏菌Arthrobacter ureafaciens

小鼠正常T表達和分泌因子(RANTES/CCL5)免疫試劑盒絲抑制蛋白激C底物抗體人內分泌腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)二氫姜黃

小鼠整合αM(Itgam/CD11b)免疫試劑盒核突觸蛋白α抗體人內分泌腺來源的血管內皮生長因子(EG-VEGF)二氫辣椒堿

小鼠整合α-IIb(Itga2b/CD41)免疫試劑盒自噬相關蛋白4B抗體人睫狀神經營養(yǎng)因子(CNTF)二氫辣椒酯

小鼠整合α5(Itgax/CD11c)免疫試劑盒整合樣金屬蛋白與凝血1型-12抗體人睫狀神經營養(yǎng)因子(CNTF)二氫兩面針堿
PI3K/AktandmTOR抑制劑（PI-103）SNAIL 英文名稱： Snail蛋白抗體 0.1ml

eIF1 英文名稱： 真核翻譯起始因子1抗體 0.2ml

轉移抑制蛋白1抗體 Anti-CD82/KAI1 0.1ml

Anti-VHL/FITC 熒光素標記一種抑制因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-GAP43(Ser41) 磷酸化神經生長相關蛋白43抗體 規(guī)格 0.1ml

CGA(Chromogranin A) 嗜鉻粒素A抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg