商品介紹:
BTB06584是一種IF1依賴性的選擇性線粒體F1Fo-ATP酶抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:219793-45-0 純度:98.48% 分子量:417.82 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員5(TNFRSF5)ELISA試劑盒 ,英文名: TNFRSF5 ELISA Kit
犬γ氨基丁酸(GABA)ELISA檢測試劑盒CanineGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit 96T/48T
犬雙氫睪酮(DHT)免疫試劑盒 Canine Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit
英文名稱HumanLPSELISAKit人脂多糖(LPS)規(guī)格:96T/48T
超氧化物歧化酶(SOD)組織裂解樣品制備試劑盒50次
Ratheatshockprotein20,hSP-20ELISA試劑盒大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素17B(IL17B)ELISA試劑盒 ,英文名: IL17B ELISA Kit
人固酮(ALD)ELISA檢測試劑盒humanaldosterone,ALDELISAKit 96T/48T
大鼠緊密連接蛋白(Ocln)免疫試劑盒 Rat Occludin,Ocln ELISA kit
英文名稱RatMGβ2ELISAKit大鼠β2微球蛋白(MGβ2)規(guī)格:96T/48T
咖啡阿斯巴塘(aspaame)含量薄層色譜法定性檢測試劑盒20次
ELISAKitALD人縮酶規(guī)格:48T/96T
豬內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human thyroglobulin (TG) ELISA Kit 人甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒
GuineaPig50%complemehemolysis,CH50ELISAKit 豚鼠血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforAMS/AMY(HumanAlpha-Amylase)ELISAKit人α淀粉酶規(guī)格:48T/96T
血液谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20次
Porcineai-thrombieceptor,AELISAKit豬抗凝血酶受體(A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
線粒體F1Fo-ATP酶抑制劑(BTB06584)STAT1 英文名稱: 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 0.1ml
phospho-FSCN1(Ser39) 英文名稱: 磷酸化纖維束蛋白同源物1抗體 0.1ml
小鼠抗血藍(lán)蛋白抗體 Anti-Mo anti-KLH 0.2ml
Anti-Phospho-SATB1 (Ser47)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PDGFRA(Tyr572) 磷酸化血小板源性生長因子受體α 規(guī)格 0.1ml
rHBeAg(Hepatitis B Virus E Antigen protein) 重組乙肝病毒e抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 100ug