以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
商品介紹:
AG555是一種EGFR酪氨酸激酶抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:133550-34-2 別名:Tyrphostin AG 555 純度:98.0% 分子量:322.36 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
小鼠腫瘤壞死因子配體超家族成員13(TNFSF13)ELISA試劑盒 ,英文名: TNFSF13 ELISA Kit
犬葉酸(FA)ELISA檢測試劑盒CanineFolicacid,FAELISAKit 96T/48T
犬腎素(Renin)免疫試劑盒 Canine Renin ELISA Kit
英文名稱HumanPCNAELISAKit人增殖細胞抗原(PCNA)規(guī)格:96T/48T
陳舊血紅細胞溶解液500毫升
Ratheatshockprotein70,hSP-70ELISA試劑盒大鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素17(IL-17)ELISA試劑盒 ,英文名: IL-17 ELISA Kit
大鼠白細胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA檢測試劑盒RatActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule,ALCAMELISAKit 96T/48T
人SMAD2 免疫試劑盒 Human SMAD2 ELISA Kit
英文名稱MouseFXELISAKit小鼠凝血因子X(FX)規(guī)格:96T/48T
VMA高效液相色譜電化學定量檢測試劑盒20次
Rabbitplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISA試劑盒兔纖溶酶抗纖溶酶復合物(PAP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬免疫球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human thyroxine aibody (TAb) ELISA Kit 人甲狀腺素抗體(TAb)ELISA試劑盒
Guineapigierleukin4,IL-4ELISAKit 豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝
CLIAKitforAMPKELISAKit大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶規(guī)格:48T/96T
血液瓜氨酸含量比色法定量檢測試劑盒20次
PorcineAngiopoietin2,ANG-2ELISAKit豬血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
EGFR酪氨酸激酶抑制劑(AG 555)5-lipoxygenase activating protein 英文名稱: 5脂氧合酶激活蛋白抗體 0.2ml
FBXO39 英文名稱: XIAP相關(guān)因子1凋亡抑制蛋白抗體 0.1ml
基質(zhì)金屬蛋白酶-3抗體 Anti-MMP-3 0.1ml
Anti-SAMDC/AMD1/FITC 熒光素標記S-腺苷蛋氨酸脫羧酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-PDGFRA(Tyr988) 磷酸化血小板源性生長因子受體α 規(guī)格 0.1ml
ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) ??窠?jīng)毒素(35肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1mg