以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Ethacridine lactate是一種聚(ADP-核糖)糖基水解酶(PARG)抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1837-57-6 別名:Acrinol 純度:99.20% 分子量:343.38 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
牛大力(美麗崖豆藤)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Salvianolic acid B少突膠質(zhì)髓鞘相關(guān)蛋白抗體包裝5g
牛膽粉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Salvianolic acid CCDC42結(jié)合蛋白激α抗體(MRCKα)包裝1g
牛耳楓(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Salvianolic acid D髓樣分化蛋白抗體包裝5g
牛黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cholesterol外周髓磷脂P0蛋白/P0蛋白抗體包裝100g
?;蛆Z去氧膽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cholesterol褪黑受體1A/松果體受體1A抗體包裝25g
牛膝(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cholic acid肌生成抗體包裝25g
牛至(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cholic acid磷化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝5g
扭肚藤(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: LobetyolinDNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體包裝1g
女貞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: α-mangostin磷化DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體包裝5g
女貞子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diosimin蛋白激MST抗體包裝1g
諾米林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diosimin磷化蛋白激MST抗體包裝25g
糯稻根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Momordin Ic磷化肌球蛋白輕鏈2抗體包裝5g
歐當(dāng)歸內(nèi)酯A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ziyuglycoside I髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝1g
歐夾竹桃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ziyuglycoside II髓樣白血病-1抗體包裝250mg
歐前胡(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Eugenol微管相關(guān)蛋白2抗體包裝5g
幽門螺桿菌Helicobacter│pylori 質(zhì)量規(guī)格:BS抗肌內(nèi)膜試劑盒短葶山麥冬皂苷C; liriope mu
大腸埃希氏菌DH5α/T/linker-gfpEscherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:BS抗肌集鈣蛋白抗體試劑盒丹參新 ; Miltirone
: AS1.2863=ATCC17397=LMG5916資源名稱: 熒光假單胞菌 質(zhì)量規(guī)格:IND抗肌動(dòng)蛋白抗體試劑盒丹酚C; Salvianolicaci
PARG抑制劑(Ethacridine lactate)脂肪膜相關(guān)蛋白抗體谷脫羧自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)檢測(cè)試劑盒GAD-Ab-IgG ELISA Kit
載脂蛋白A1結(jié)合蛋白抗體抗體谷脫羧自身抗體(GAD-Ab)檢測(cè)試劑盒GAD-Ab ELISA Kit
載脂蛋白B-mRNA編輯復(fù)合物1抗體谷脫氫(GDH/GLDH)檢測(cè)試劑盒GDH/GLDH ELISA Kit
載脂蛋白B-mRNA編輯復(fù)合物2抗體孤腓肽(OFQ/N)檢測(cè)試劑盒OFQ/N ELISA Kit
載脂蛋白B-mRNA編輯復(fù)合物3B抗體鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)檢測(cè)試劑盒Lep IgG ELISA Kit
載脂蛋白B-mRNA編輯復(fù)合物3C抗體睪(Testoterone)檢測(cè)試劑盒Testoterone ELISA Kit
載脂蛋白C1抗體睪(T)檢測(cè)試劑盒T ELISA Kit
載脂蛋白C2抗體高鐵血紅蛋白(MHB)檢測(cè)試劑盒MHB ELISA Kit
載脂蛋白L1抗體高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)檢測(cè)試劑盒HMGB-1 ELISA Kit